病毒学检验知识点.docx

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1、病毒学检验知识点病毒学检验一类非细胞型微生物；严格细胞内增殖（立克次体、衣原体、病毒不能在培养基中培养）；结构增殖异常增殖形态多样；由核酸与蛋白质构成；具有受体连结蛋白；核酸：核心，只含有一种类型（DNA或RNA）；衣壳：蛋白质包裹核酸形成保护性外壳；复制周期：吸附：病毒体与易感细胞的特异性结合；穿入：穿过细胞膜进入细胞；三种方式：胞饮或内吞、融合、转位；脱壳：核衣壳脱去蛋白质壳（即衣壳）；生物合成：复制与基因表达；DNA病毒的复制：1.顿挫感染：复制增殖的速度很快，部分或完全不能装配，产生了没有传染性的病毒体。传入另一种合适的细胞中有传核酸+衣壳=核衣壳（即最简单的病毒）；衣壳有3种对称型：

2、螺复制时以亲代DNA为模板，按核酸半保留形式复制，在细胞核内合成DNA,在细胞质内翻译出病毒蛋白，在胞质内装配成完整的子代病毒体。染性的。2.缺损病毒：指病毒核酸基因旋对称、RNA病毒的复制：有遗传缺陷，单独在20面体病毒全部遗传信息均含在RNA中。宿主细胞内不能合立体对根据病毒核酸的极性，分为正链RNA病毒和负链成病毒所需的全部称、复合RNA病毒.成分，不能增殖成有对称；为病毒鉴定与正链RNA:病毒RNA的碱基序列与mRNA完全相同，这种病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用，附着到宿主细胞核糖体上，翻译出病毒蛋白。从正链RNA病毒颗粒中提取出RNA,证明有感染传染性的病毒体。与辅助病毒共同感

3、染一一有传染性。3.病毒干扰：分类的性。两种病毒感染同依据有些病毒核衣壳外有包膜即包膜病毒：包膜病毒：核衣壳出芽负链RNA:病毒RNA碱基序列与mRNA互补，其病毒颗粒中含有依赖RNA的RNA多聚酶，可催化合成互补链，成为病毒InRNA,翻译病毒蛋白。从负链RNA病毒颗粒中提取出的RNA,因提取过程一个细胞时：（1）两者共同增殖，加重感染；（2）一种病毒被抑宿胞释3宿膜表有即包要为对从细外财有胞力常起第主分类时主向放含主成面突刺膜成脂损坏了这种酶，从而无感染性。组装：字代病毒与蛋白质合成后，衣壳蛋白对病毒核酸进行包装形成核衣壳，完成组装；释放：无包膜病毒使宿主细胞破裂而一次性将病毒全部释放至细

4、胞外；包膜病毒通过芽生方式，获得包膜，出芽释放，细胞一般不死亡，仍可分裂繁殖；制而另一种病毒大量增殖。后一种情况称之为病毒干扰现象。剂常鉴毒包溶感来病无脂敏用定有腺呼吸道病毒检验分类临床意义主要生物学特性检验方法流行性感冒病毒（正粘病毒科）分为甲型、乙型、丙型；甲型：易变异、传染性强、常引起大流行；根据血凝素HA（I6亚型）与神经氨酸酶NA（9亚型）分为若干亚型；乙型：局部、中小型流行球形；结构：（核酸+蛋白）核衣壳+包膜；核衣壳：核心，被核蛋白NP包绕，螺旋对称，有RNA聚合酶；核酸：单负链分节段RNA,甲型与乙型分8个节段，丙型分7个；易基因重组导致变异；包膜：基质蛋白MP和脂质双层组成；

5、刺突：分为HA与NA,极易变异一甲型分类主要依据HA（柱状）；凝集红细胞一定性；吸附宿主细胞与受体结合；免疫原性一产生抗体一中和病毒/抑制血凝一定性；NA（蘑菇状）：参与病毒释放；促进病毒扩散；免疫原性一产生非中和抗体；变异形式：抗原性转变（质变）：（原因）HA/NA基因突变/重组；（特点）突出激烈、不连续、形成新的亚型；（结果）大规模流行；抗原性漂移（量变）：（原因）HA/NA突变或人免疫力下降；（特点）经常性、逐步连续改变；（结果）小规模流行；标本采集：鼻咽拭子；低温保存、迅速送检；不能立即检查的储存在-70。；常用荧光显微镜观察；（做直接荧光抗原染色标本不能冻存，应直接处理）；分离培养一

6、实验室金标准；在鸡胚中培养初次分离用羊膜腔；传代用尿囊腔；收获羊水、尿囊液进行血凝试验，阳性再做血凝抑制试验HI;快速诊断：Ag、IEM、核酸检测;麻疹病毒（副粘病毒科）麻疹（前驱期、出疹期、恢复期）第一次菌血症一第二次即柯氏斑、皮肤斑丘疹；只有一个血清型；球形；不分节段单股负链RNA；核衣壳螺旋对称，有包膜，包膜内部为膜蛋白M,表面有HA和融合蛋白F刺突；显微镜检查：观察细胞融合和多核巨细胞特征；观察胞质和胞核内嗜酸性包涵体；电镜观察包涵体内麻疹病毒颗粒；抗原检测、核酸检测；分离鉴定：处理后接种人胚肾细胞、Ver0、HeIa等细胞,待出现轻微CPE或红细胞吸附实验，进行鉴定；抗体检测：IgM

7、可协助检测，效价增高四倍即可确诊；冠状病毒SARS、新冠严重急性呼吸系统综合症离心培养法：培养SARS用Vero细胞系，病变细胞呈CPE、局灶性变圆、折光性变强、晚期呈葡萄串状；需在三级生物安全室；中和试验NT一一金标准；双份血清标本抗体转阳或滴度4倍及以上升高才有意义；肠道病毒检验共同特征：球形，直径小，无包膜，VPK2、3、4构成；单股正链RNA；宿主细胞质内增值、细胞病变；耐乙酸，耐酸；粪口传播，儿童感染为主；分类临床意义主要生物学特性检验方法脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病原体一一小儿麻痹；分为I、II、In型;临床过程：侵入人体一一潜伏期；局部淋巴组织繁殖一一隐性感染；第一次病毒血症：发热

8、、头痛、恶心、呕吐、腹泻一一顿挫型脊髓灰质炎；第二次病毒血症：暂时型肌肉麻痹、无菌性脑炎一一无麻痹性脊髓灰质炎；1%-2%侵犯中枢神经系统：延髓受损一麻痹性脊髓灰质炎；预防：减毒活疫苗；球形颗粒，20面体立体对称，无包膜；生存能力很强，加温56半小时可被灭活；核酸检测抗原检测抗体检测柯萨奇病毒CV与埃可病毒ECHO柯萨奇病毒有A、B两组；粪口传播；可致疱疹性咽峡炎、手足口病、脑膜炎等等；柯萨奇病毒：只有从心包液或疱疹液分离出病毒确诊轮状病毒婴幼儿秋季腹泻肝炎病毒检验甲、戊一消化道传播、急性肝炎；乙、丙一血液传播、急慢性肝炎、肝硬化;分类临床意义主要生物学特性检验方法甲肝HAV粪口传播一肠道大量

9、增殖一入血（病血症）一肝脏（最终靶器官）一随粪排出；潜伏期为30d；临床表现为急性黄疸型、急性无黄疸型、急性重型肝炎；再感染具有免疫防御能力；球形、无包膜、20面体立体对称；单股正链RNA,只有一个血清型；实心颗粒:衣壳蛋白与RNA基因组构成的完整成熟病毒体,具有感染性与抗原性；空心颗粒:缺乏病毒核酸的空心衣壳，无感染性但有抗原性；基因组：5末端非编码区（5NCR）+开放读码框架0FR+3,NCR；5,NCR：最保守的序列，参与翻译；OFR分为PKP2、P3三个功能区：P1区编码衣壳蛋白，具有抗原性；P2、P3区编码非结构蛋白：P2区编码2A、2B、2C蛋白；P3区编码3A（锚定细胞膜）、3B

10、（启动病毒RNA复制）、3C（蛋白酶）、3D（RNA聚合酶）蛋白；3,NCR：后接-PO1yA尾，与RNA稳定性有关；培养.i殖缓慢、不释放、无CPE、无血凝；采集血清或血浆；镜检颗粒；抗体检测：抗HAVIgM最常用最特异的指标一确诊；E11SA法；抗原检测、核酸检测等；急性肝炎：临床症状（疲乏、腹痛、恶心、呕吐）和黄疸或血清氨基酸转移酶水平升高；乙肝HBV血液、母婴、接触传播；临床类型多样：急性、慢性、肝硬化等；携带者更危险；潜伏期60-180d；3种颗粒：大球形颗粒（Dane颗粒）：完整的感染性病毒颗粒，双层衣壳；外衣壳由脂质双层与蛋白质组成，镶嵌乙肝表面抗原HBSAg；内衣壳是核心结构,

11、表面为乙肝核心抗原HBCAg,HBeAg;核心内部有DNA及酶；小球形颗粒：成分HBsAg与少量前S抗原，不含核心基因培养：仅限于高级灵长类动物；免疫学检测：HBV标志物病原学检测金标准;E1ISA法；（两对半检测）HBeAg可分泌入血循环；HBcAg分泌到感染的肝细胞中，故血清种无C抗原；故检测两对半抗原e与s；HBSAg与抗HBs：组，无感染性,由组装Dane颗粒时产生的过剩病毒衣壳装配而成；管型颗粒：成分与小球形颗粒相同，由小球颗粒连接而成；基因组：不完全闭合环状双链DNA；含4个部分重叠的ORF：前S/S区：编码包膜蛋白；前C/C区编码HBeAg.HBcAg;（一段基因重复编码两种蛋白

12、）P区编码DNA聚合酶；X区编码X蛋白，具有抗原性（HBxAg与原发性肝癌关系密切）；HBsAg第一个出现的血清学标志物，存在于三种抗原中；在HBsAg从血清中消失后发生抗HBs转阳（核心窗口期易漏诊误诊）；抗HBS为中和抗体，乙肝康复的标志，疫苗接种成功的标志；HBeAg与抗HBe：HBeAg仅存在于Dane颗粒，是HBV复制及传染性强的指标；抗HBe出现于HBeAg阴转后；抗HBc：HBcAg是HBV存在和复制活跃的直接指标，量微不检，原因上述；早期IgM为主，随后IgG;核酸检测（荧光PCR）、基因型检测、耐药突变位点检测（YMDD突变：P基因区基因变异）；丙肝HCV慢性肝炎球形，包膜+

13、衣壳+核心；存在形式有4种:完整HCV颗粒、不完整HCV颗粒、与免疫球蛋白或脂蛋白结合的颗粒。由感染细胞释放的含HCV成分的小泡；仅含有单一0RF；5NCR参与复制与蛋白转译；3,NCR参与稳定性维持与翻译；免疫学检测、基因检测、核酸检测丁肝HDV缺陷病毒与HBV关系密切单股负链RNA病毒，有9个ORF免疫学：抗HDVIgM核酸检测HBV检验临床分析HBsAg抗HBSHBeAg抗HBe抗HBC临床意义+一急性、慢性、潜伏期、无症状携带+一急性或慢性，传染性强（大三阳）+一I+乙肝后期、慢性乙肝、复制水平低（小三阳）一i一I乙肝康复，有免疫力一一I-乙肝康复，有免疫力I乙肝康复或接种过疫苗，有免

14、疫力一一一一未感染过乙肝，易感反转录病毒检验分类临床意义主要生物学特性检验方法人免疫缺陷病毒HIV输血、性接触、垂直、注射传播；分为：包膜+核心；（外层）脂蛋白包膜，嵌有gp12（kgp41；病原学检查：病毒分离培急性HIV感染期：发热、淋巴肿大、咽炎、皮肤斑丘疹；处于窗口期，HIV抗体检测为阴；慢性感染期：无症状H1V感染期,HIV抗体阳性；艾滋病期：出现持续性或间歇性全身症状，全身乏力、厌食、发热、夜间盗汗、血小板减少；出现卡波济肉瘤、卡氏肺囊虫肺炎等机会性感染；逃逸机制：H1V直接损伤CD4T细胞；HIV抑制抗原提呈细胞；HIV诱发自身免疫疾病及细胞凋亡；CD8T细胞丧失抗病毒活性；（核心）含2个相同拷贝的病毒RNA、反转录酶、核衣壳蛋白P24；基因组：2条相同的单股正链RNA；gap基因：编码核衣壳蛋白P7、内膜蛋白p17衣壳蛋白p24；env基因：编码g