超氧阴离子清除能力试剂盒说明书.docx

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1、超氧阴离子清除能力试剂盒说明书微量法100T/96S注意；正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋H质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。测定原理：AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成N2,NO2与对氨基苯磺酸和一蔡胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。自备实验用品及仪器：天平、研钵、低温

2、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。试剂组成和配制：提取液：液体IOom1x1瓶，4保存。试剂一：液体15m11支,4避光保存。试剂二：粉剂X1瓶，4C避光保存。临用前加6m1蒸播水充分溶解。试剂三：液体7.5m11瓶，4C保存。试剂四：液体7.5m11瓶，4避光保存。试剂五：液体7.5m11瓶，4避光保存。样品处理1 .组织：按照质量（g）：提取液体积（m1）为1：510的比例（建议称取约0.1g,加入Im1提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4,IOOOOg离心Iomin,取上清置于冰上待测。2 .细胞：按照细胞数量（IO4个）：提取液体枳（m1）为50010

3、00:1的比例（建议500万细胞加入Im1提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w,超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4C,10000g离心IOmin,取上清置于冰上待测。3 .培养液或其它液体：直接检测。4,粉剂药物可配制成相同浓度，比如Img/m1。测定操作对照管测定管试剂一（1）1010试剂二（1）4040H2O(1)25充分混匀，25反应Imin样品(1)25试剂三(1)5050充分混匀，37tC反应30min试剂四(1)5050试剂五(1)5050充分混匀，37显色20min,于微量石英比色皿/96孑管的吸光值，分别记为A对照管和A测定管。1板，在530nm处测定对照管和测定注意I对照管只需测定一次。计算公式，超氧阴离-A对%鬻定管XKX)%注意事项，1 .试剂一4C可保存2个月，配制好的试剂二4七可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。2 .样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24小时。