输血科ABO抗体效价测定操作规程.docx

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1、26生效日期：2014.11修改日期：2014. 10类另小操作规程部H：输血科名称：输血科母体ABO抗体效价测定操作规程新 增：ABO抗体效价测定(母亲血清IgG抗A (B)测定)【目的】用于ABO血型IgG抗A (B)效价测定，如疑为ABO血型不合可致新生儿溶血病的母亲血清中IgG抗A (B)测定。【范围】所有送检的孕妇标本。【职责】实验室负责IgG抗体效价测定。【原理】母体血清中的IgG抗体可通过胎盘，与胎儿红细胞表面的父源性抗原结合，引发溶血。经筑基试剂(2-Me)处理母体血清，IgM抗体效价被破坏，此时运用辅助检测IgG抗体的方法如抗球蛋白实验等，就可以进行IgG抗体效价测定(半定量

2、)。血清经连续倍比稀释后与选定的红细胞反应，以肉眼可见的1+凝集程度的最高血清稀释度的倒数来表示效价。【标本采集和处理】1、标本采集：常规静脉采血3ml于含促凝剂的试管中2、标本保存：室温放置不超过8小时，4保存不超过72小时，无溶血现象。【设备与试剂】1、02molL2基乙醇（2Me）应用液。2、受检者（孕妇）血清。3、0.9%NaCLo4、抗人球蛋白检测卡（凝胶微柱）包装规格：12卡/盒储存条件及有效期：18-25C避光保存。有效期为自组装之日起12个月注册号：国食药监械（准）字2010第3400983号企业名称：长春博迅生物技术责任有限公司5、BaSo2005-2型医用低速离心机：珠海贝

3、索生物技术有限公司6、TD-3A型血型血清学用离心机：长春博研科学仪器有限责任公司7、FYQ型免疫微柱孵育器：长春博研科学仪器有限责任公司8、HH W21 600S型数显电热恒温水温箱：上海跃进医疗器械厂9、加样器（固定50l）和加样器滴头【方法】微柱凝胶（抗人球蛋白凝胶）卡式法1）取待检者血清200l,加0.2molL 2-Me 200l,混匀后封盖置于37水浴箱孵育30min-60mio2）按照血清稀释度标记一排试管，编号16,第一管加生理盐水1.4ml,其余试管各加生理盐水200lo3）取破坏后的混合血清200l加至第一管混匀，再从第一管中取200l血清稀释液加至第二管，依此经倍比稀释，

4、制备出稀释度从16倍至512倍的待检者血清。4）将准备好的母体IgG抗体效价检测卡做好标记，依次由低浓度至高浓度，从右至左各加50l血清稀释液于凝胶卡的孔中，再从左至右各加50l 0.5% 0.8%表达父性抗原的红细胞悬液于凝胶卡的孔中。5）凝胶卡孵育器中37孵育15min,于微柱凝胶卡专用水平离心机观察并评价试验中离心 5min (900rpm 2min,1500rpm 3min)o 取出,结果。【结果判定】1、阳性：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。2、阴性：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。3、反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中，为弱阳性反映；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。（见下表1）表1反应强度现象及说明4红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面3大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部1红细胞复合物位于凝胶中下部红细胞完全沉积在凝胶管尖底部混合凝集红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部【支持文件】血站技术操作规程【相关记录】产前免疫学检查登记本