Waters 600-2998 高效液相色谱系统操作规程.docx

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1、Waters 600-2998高效液相色谱系统操作规程1 .目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。2 .范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。3 .职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。4 .系统组成本系统由Waters 600多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Walers在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2998紫外检测器、Empower色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机等辅助设备。5 .程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相

2、必须用0.45用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通电源，依次打开脱气机、60（）泵、2998检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。5.2.1.2. 打开Empower软件，出现Empower登录窗口，输入用户名system和密码manager,进入Empower Pro窗口。在“浏览项目内选择所需的项目，“运行样品”内选择系统Waters-600-

3、7725-2998 进入运行样品窗口。5.2.2. 更换溶剂522.1.打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.22将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.223.按Direct键使其显示直接控制屏幕，设流速为Iml/min （梯度配比阀在0ml/min时不工作）；522.4.选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%,其它为0%；5.225.将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.26逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂;5.227.再将输液管放入新溶

4、剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；522.8.转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。5.229.重复522.4.522.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。5.2.3. 排气泡5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为（甲醇：超纯水=1： 9）,设流速为7ml/min （注意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱）；1.1. 32转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；5.233. 顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入泵中）；5.234. 按Stop flow屏幕键停泵，关上参照阀。5.

5、235. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为10ml/min,冲洗25min （或更长时间）后停泵，重新接上柱。53平衡系统（分两种情况进行）5.3.1. 等度模式5.3.1.1. 每次以O.lml/min的增量加大流速至1 ml/min,以甲醇:超纯水=1 ：9冲洗系统10mino5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的510%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。5.3.1.4. 波动平稳后，换检验方法规定

6、的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少56倍柱体积的流动相通过系统。5.3.1.5. 在“运行样品”窗口下的“方法组”档内选择所需的方法组，按“监视器”（此后泵由软件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移l（PAu/min,噪声为10Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。531.6. 按“中断”红色图标（左上第五个），停止监视基线。5.3.2. 梯度模式5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。5.3.22在进样前运行12次空白梯度。5.4.进样5.4.1. 在“运行样品”窗口内填写样品名、运行时间、进样体积、已编

7、辑的仪器方法，点击“创建方法组”。5.4.2. 用针头滤器过滤试样溶液，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。5.4.2.1. 如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进样量应不大于定量环体积的50%,并要求每次进样体积准确、相同；5422如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍（510倍准确性更佳）。5.4.3. 按“进样”按钮，等待窗口底部状态档内显示“等待进样”后，方可进样。5.4.4. 将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动

8、运行，采集数据并记录图谱。5.4.5. 让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前12min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。5.4.6. 先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。55数据处理（外标法）和打印5.5.1. 右击系统主界面下的“浏览项目”图标，选择相应的项目，进入“项目”窗口，选“通道”标签。5.5.2. 建立处理方法选择一个待积分的标准，右击后选“查看”进入“查看”窗口。按文件一新建处理方法一选择处理类型“LC”，打勾“处理方法向导”。5.5.2.1. 划入一个感兴趣的最窄的峰，按“下一步”；5522划入一段包含噪声的基线，按“下一步”；5

9、52.3.划入一段要积分的区间，按“下一步”；5.524.根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按“下一步”、“下一步”；5.5.25在“名称”档内输入各组分峰的名称，按“下一步”，退出“查看”窗口。5.5.3. 处理数据“项目”窗口下，“通道”标签中选择响应的项目，右击选择“处理”，进入后台处理和报告窗口，选择刚才创立的处理方法，点击“确定回到项目”，从“结果”标签中查看结果。5.5.4. 数据处理完成后，关闭所有窗口，关闭Empower软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。5.6.清洗系统和关机5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗lOmin后，换甲醇：超纯水=1： 9冲洗。5.6.2. 清洗进样阀5.6.2.1. 用启动注射器吸10ml超纯水；1.1 .22将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针）,并将它们一起接到进样口上；562.3 .使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.631. C18柱先用甲醇：超纯水=1： 9以Iml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙席冲洗20mino5.6.4. 清洗完成后，先将流速降到0,再依次关闭泵、脱气机、UPS,断开电源。5.6.5. 填写使用记录。