血尿中乙醇甲醇正丙醇乙醛丙酮异丙醇正丁醇异戊醇的定性分析及乙醇甲醇正丙醇的定量分析方法.docx

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1、血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析方法(GA/T105-1995)1顶空气相色谱法1.1 适用范围：适用于低级醇类、醇性饮料中毒或中毒死亡者的血液和尿液中乙醇对血液、尿液样品中进行乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析。1.2 原理：本法利用醇类的易挥发性，以叔丁醇为内标,用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作的醇类标准品比较，以保留时间定性；用内表法以醇类对内标物的峰面积比进行定量。1.3 器材与试剂气相色谱仪(配置火焰离子化检测器)；样品瓶(7m1青霉素

2、瓶)硅橡胶垫；聚四氟乙烯薄膜；铝帽；密封钳；注射器(Im1)；硫酸铁；甲醇标准溶液；叔丁醇1.4 操作步骤1.5 .1色谱条件a）色谱柱：（1）5%CARB0WAX20MCarbopack（80-120目）2mmX2m玻璃柱（2）PorapakS（80100目）2mmX2m玻璃柱b）柱温：柱（1）程序升温：始温70cC,速率5oCmin,终点170oC（5min）柱（2）程序升温：始温100,速率15oCmin,终点200C（IOmin）c）检测器：火焰离子化检测器（F1D）d）检测室温：230e）汽化室温：210f）载气（N2）:流速20-35m1min1.4.2定性分析1.4.2.1样品制

3、备取待测全血（或尿液）In11加入样品瓶中，加IoOUI（2mgm1）叔丁醇内标液，约1克硫酸铁，瓶口覆盖氟乙烯薄膜，硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，置60。C水浴中加热1520mino同时取空白全血（或尿液）两份，其中一份添加内标溶液IOOUI和乙醇标准使用液20UI（20ug）,按上述程序平行操作以进行空白对照和已知对照分析。1.4.2.2进样用ImI注射器分别吸取检材、空白对照和已知对照瓶内液面上的气体约O.5m1,注入气相色谱仪中，每个试样进样23次，并注入醇类标准溶液。1. 4.2.3记录与计算分别记录各试样中内标物，醇类标准品和可疑醇峰的保留时间，填入GC定性分析结果中，计算它们

4、的保留时间平均值，并以内标物的保留时间为1,计算醇的相对保留时间值。1.5 定量分析1.6 .1样品制备精密吸取待测全血（或尿液）0.5m1两份，分别加入样品瓶内，加IOOU1（2mgm1）叔丁醇内标液，按15.2.1密封瓶口后，混匀，置60。C水浴中加热152OnIin。另取空白全血（或尿液）两份，根据检材中醇含量的多少，添加乙醇（或甲醇、正丙醇）标准使用液20ug2mg,内标液IOoUI（200ug）按上述方法平行操作。1.5.2检测按15项中所述操作进行。1. 5.3记录与计算15.3.1记录检材及空白添加标准品中乙醇（或甲醇、正丙醇）及内标物峰面积值，填入GC定量分析记录表中，并算出各

5、检材乙醇（或甲醇、正丙醇）及内标物的平均峰面积值。1. 5.3.2计算相对校对因子错误!未找到引用源。空白检材中醇添加量X内标物峰面积平均值一空白检材中内标添加量X醇面积平均值1. 5.3.3计算检材中醇含量W(mg100m1)_/X检材中醇峰面积平均值X内标添加量(Ug)X1oO一检材中内标物峰面积平均值X检材量X10001.5. 3.4计算相对相差相对相差(%)JW-WJ00W式中：W1,W2为两份检材平行定量测定的结果，W为两份检材平均值。1.6. 结果评价16.1定性结果评价1.7. 11本法血、尿中乙醇、甲醇的最低检出限为1ugm1o正丙醇的最低检出限为IOUg/m1。如果添加于空白

6、检材中20Ug乙醇出现相应的色谱峰，而检材未出现相应的醇类色谱峰，可以认为检材中不含醇类，阴性结果可靠。如果添加于空白检材中20Ug乙醇未出现相应的色谱峰，而检材未出现醇类色谱峰，属操作有误，阴性结果不可靠，应重新检验。1.8. 1.2如果空白检材未见出醇类色谱峰，而检材有醇类色谱峰时。说明空白无干扰，阳性结果可靠，经不同的色谱条件，结果一致时一般可以认定检材中含有某种醇类物质。必要时，用GC/MS确证。16.2定量分析结果评价两份检材的相对差若不超过15%时，结果按两份检材含量的平均值计算，相对相差若超过15%,需重新进行测定。2直接进样气相色谱法2. 1原理本法利用蛋白沉降剂，使蛋白凝固，

7、经离心后取含醇类化合物的上清液用气相色谱火焰离子化检测器进行检测，与平行操作的醇类标准品比较，以保留时间或相对保留时间定性，用内标法以醇类内标物的峰面积比进行定量。2. 2试剂与仪器气相色谱仪(配置火焰离子化检测器)；漩涡振荡器；离心机(4000rmin);尖底具塞离心管(5m1)；微量进样器甲醇标准溶液；叔丁醇；6%高氯酸2.3操作步骤2. 3.1样品制备取待测全血(或尿液)0.5m1于离心管内，加50U1(2mgm1)叔丁醇内标液，血样加05d6%高氯酸，用漩涡振荡器混匀，以3000rmin速度离心。同时取空白全血(或尿液)两份，其中一份添加内标溶液50UI和乙醇标准使用液20u1(20u

8、g),按上述程序平行操作以进行空白对照和已知浓度对照。2. 4检测2. 4.1色谱条件色谱柱：(1)5%CARB0WAX20MCarbopack(80-120目)2mmX2m玻璃柱(2) PorapakS(80-100目)2mmX2m玻璃柱柱温：柱(1)程序升温：始温7(TC,速率5oCin,终点170oC(5min)柱(2)程序升温：始温100,速率15Cmin,终点200。C(IOmin)检测器：火焰离子化检测器(Fn)检测室温：230。C汽化室温：210载气(Nz):流速2035m1min燃气(H2)和空气：流速根据仪器条件选定2.4.2进样用IoU1微量进样器分别吸取检材的空白对照和已

9、知对照管内上清液IUI注入气相色谱仪中，每个试样进样三次，并注入醇类标准溶液。2.4.3记录与计算记录检材及空白添加标准品中乙醇(或甲醇、正丙醇)及内标物峰面积值，填入GC定量分析记录表中，并算出各检材乙醇（或甲醇、正丙醇）及内标物的平均峰面积值。2.5定量分析2.5.1样品制备精确吸取待测全血（或尿液）0.5m1两份，分别加入离心管内，加50U1叔丁醇内标液，按2.3.1沉淀蛋白，离心。同时取空白全血（或尿液）两份，根据检材中醇含量的多少，添加乙醇（或甲醇、正丙醇）标准使用液20ug-2mg,内标液50U1（IOOug）按上述方法平行操作。2. 5.2检测按2.4项中所述操作进行2.5.3记录与计算按2.4.32.6结果评价1.1.1 6.1本法血、尿中乙醇、甲醇的最低检出限为10ugm1o如果添加0.5m1空白检材中20ug乙醇未出现相应的色谱峰,而检材未出现醇类色谱峰，属操作有误，阴性结果不可靠，应重新检验。1.1.2 如果空白检材未见出醇类色谱峰，而检材有醇类色谱峰时。说明空白无干扰，阳性结果可靠，经不同的色谱条件，结果一致时一般可以认定检材中含有某种醇类物质。必要时，用GC/MS确证。1.1.3 定量分析结果评价同1.6.2