47初始污染菌检验规程.docx

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1、发展有限公司初始污染菌检验规程XY1-Z1-47编制受控状态受控审核版本/状态A/0批准生效日期2023年02月28日序号修改内容修改人批准人修订口期1 .目的：制订初始污染菌检验规程，对从事检测的操作人员进行培训指导按检测规程操作。2 .范围：本方法适用于一次性使用无菌医疗器械灭菌前染菌量的检测。3 .术语和定义：无4 .职责：质量部负责实施。5 .内容:5.1仪器电子天平、电热恒温干燥箱、净化工作台、压力蒸汽灭菌器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱、电炉。5.2器具烧杯、量筒、三角瓶（带硅胶塞）、试管（带硅胶塞）、酒精灯、手术剪刀、培养皿、刻度吸管、薄膜过滤器5.3培养基、试剂：胰酪大豆陈琼脂培

2、养基、无菌生理盐水5.4试验前的准备5.4.1胰酪大豆陈琼脂培养基的制备：按产品说明书进行配制、灭菌，供细菌培养记数用。5.4.2无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液）的制备：a.配制：称取9.Og氯化钠加入蒸僧水溶解使成IOoOm1b.分装：分装于试管中，装量不得超过试管容量的2/3,盖上硅胶塞，包好。c.灭菌：121C20分钟高压灭菌。5.5取样方式a）灭菌前随机抽取样品；b）抽取不适于销售的产品，如废料或不合格品（即已经过各关键工序的生产过程阶段（包括清洗和包装过程）的产品）；c）初包装材料可用无菌手续取样随即取10套/件（卷料无菌手续取100cm2）O注：以上方式可根据产品具体情况择其一操

3、作；5.6取样频率当月生产各产品至少抽取一批次；每批来料初包装材料最少抽取一次。5.7试验步骤5.7.1消毒：将待检的产品外包装用酒精棉擦拭后，放于经擦拭的垂直式超净工作台面,紫外灯照射0.5小时以上。5.7.2供试液的制备：按无菌操作法制备供试液，制备后应在2小时内进行检测；若保存在28,可在24小时内使用。5.7.3用无菌注射器吸取10IOOm1无菌生理盐水，注入样品管内往返振荡5次；外部用无菌注射器吸取10100m1无菌生理盐水冲洗管壁；内外壁如此各重复二到三次。分别将供试液注入无菌容器中，分别检测。5.7.4以上制备的供试液直接或稀释后采用薄膜过滤法、平板计数（平皿法）或其他适宜方法进

4、行分析检查。5.7.9检查法5.7.10平皿法：a.采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续23个稀释级的供试液。b.供试液接种：D如无需稀释时，可取上述冲洗液直接接种至已灭菌的培养皿中，培养；2）如需稀释时，选择适宜的稀释级别供试液InII接种至已灭菌的培养皿中，培养。c.阴性对照试验：取供试验用的生理盐水接种2个培养皿，每个培养In1接种1.Om1,培养。d.分别将1520m1熔融并冷却至45C左右的胰酪大豆陈琼脂培养基倒入上述相应平皿中。e.培养：培养基3035C培养，培养35天。f.菌落计数：用肉眼直接计数；若平板上有2个或2个以上的菌落重叠、可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。g.结

5、果计算：平均菌落数二某一供试液每个平板的菌落数之和/平板个数（个）菌落数/每件次（或重量g）二平均菌落数X稀释倍数/件次（或重量g）X修正系数5.8薄膜过滤法：a.采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45Unb直径约为50mm,选择滤膜材质时应保证供试品及溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。b.培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100个。c.菌数报告规则以每件供试品的菌落数总数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以V1报告菌数，或以V1乘以稀释倍数的值报告菌数。5.9判定标准：5.9.1阴性对照试验平板无菌生长，符合以下条件，判为合格a.

6、灭菌产品管道类内腔WIOCfu/件次，外部W1OOCfu/件次。b.产品初包装材料W1oOCfu/件次；卷料W1OOCfU10cm2.5.9.2阴性对照试验平板有菌生长，供试品的检验无效。5.9.3修正系数计算举例5.9.4术语和定义5.9.5生物负载估计值：通过对活菌计数或灭菌前活菌计数加上一个回收率补偿系数，得出的组成生物负载的微生物数值。5.9.6修正系数：用于对活菌计数或灭菌前活菌计数进行修正的数值，以补偿产品上无法完全洗脱的微生物，以便计算出生物负载估计值。5.9.7回收率：对某一特定的技术从产品上获取微生物的能力的测定值。5.9.8给出示例来说明校正系数的计算。所引用的值不指示在实

7、际确认过程中得到的值。5 .9.9本示例中，表1中示出了重复处理（微生物在产品表面附着的程度表面特性、微生物自身和存在的其它材料的影响，为获取微生物，所进行的处理包括漂洗或同时施以物理力和直接表面取样的一种方法）确认过程中一般的理想化的数据。这些数据表示产品5个平行结果。表1某产品平行试验中通过重复处，根据表1中数据取下率计算如下：第一次处理：6050705545总数：8168846151回收率(%)：7474839088平均回收率二81.8%范围=74%90%注：琼脂覆盖的理想情况包括在本计算中，某些产品的特性可能会无法使用琼脂覆盖。产品处理方法和处理次数根据产品特性、工艺自行选择，应符合要求。使用平均取下率，计算回收率的修正系数：100818=1226 .相关文件一次性使用医疗用品卫生标准GB15980-1995医疗器械的灭菌微生物粉法第1部分：产品h微生物总数的估计GB/T19973.1-2005中国药典净化工作台使用及维护保养SOP电热恒温培养箱操作维护保养规程电热恒温鼓风干燥箱操作维护保养规程立式压力蒸汽灭菌器操作维护保养规程电子天平使用及维护保养SOP7 .相关记录产品初始污染菌检验记录检验仪器和设备的使用记录培养基配制记录培养箱温度监测记录玻璃器皿清洗记录表