细胞钾离子potassiumion浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书中文版主要用途.docx

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1、细胞钾离子(POtaSSiUmiOn)浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞钾离子(potassiumion)浓度荧光定量检测试剂盒是一种旨在通过钾离子敏感性荧光探针PBFI,与钾离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定样品中总钾离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体细胞裂解悬液样品中总钾离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。技术背景钾离子(POtaSSiUmion；K)是人体中的一种重要电介质和矿物质，尤其是细胞内和细胞外基质中的重要阳离子。其功能在于维

2、持细胞内外的酸碱平衡、渗透压、膜电位、神经肌肉功能等。血钾增高，即高血钾症(hyperka1emia)与肾衰、脱水性休克、肾上腺皮质功能不全有关；而血钾降低，即低钾血症(hypoka1emia)与营养不良、负氮平衡、胃肠道液体流失等有关。正常人体的血钾浓度范围狭窄，在3至6亳摩尔。钾的检测包括化学沉淀法、离子选择性电位分析法(ionse1ectivepotentiometry：ISP)火焰光度法(f1amephotometry).原子吸收分光光度法等技术，但容易受到其它金属元素的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。钾结合性苯并吠喃间苯二甲酸(POtaSSiUmbindingbenZofUrani

3、SOPh1ha1a1e：PBFI),是苯并吠喃间苯二甲酸衍生物，其荧光基团与重氮冠酸(diazocrownether)的氮分子链接，产生相应配体的选择性，一旦与钾离子结合，其荧光强度迅速增强，可以敏感测定游离钾离子水平。在荧光分光光度仪下，激发波长340至380nm,散发波长450至550nm,来定量测定的钾离子浓度。清理液(Reagen1A)裂解液(ReagentB)反应液(ReagentC)饱和液(Reagen1D)阴性液(Reagen1E)产品说明书产品内容XX毫升XX毫升XX亳升XX亳升XX毫升1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4冰箱里，其余的保存在一20冰箱里；反应液(Re

4、agentA)避免光照;有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器1.5毫升离心管：用于样品操作的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离微型台式离心机：用于样品制备黑色96孔板：用于样品荧光测定的容器荧光酶标仪：用于样品荧光分析实验步骤一、样品准备1 .准备好25cn细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（IX1O6细胞）2 .小心加入XX亳升清理液（ReagentA）,覆盖生长表面3 .小心抽去清理液4 .使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）5 .加入XX毫升清理液（ReagentA）,混匀细胞6 .移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细嬷认这一步聚开始

5、）7 .放进4台式离心机离心5分钟，速度为30Og8 .小心抽去上清液9 .加入XX微升裂解液（ReagentB）,充分混匀10 .转移到预冷的1.5亳升离心管11 .强力涡旋震荡15秒12 .置于冰槽里孵育30分钟13 .放进4微型台式离心机离心10分钟，速度为160Oog（或13000RPM,例如eppendorf5415）14 .小心移取上清液到新的1.5亳升离心管15 .移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用BradJbS蛋白质浓度定量试剂盒一GMS30030J）16 .即刻放进一70C保存或置于冰槽里继续后续操作一、测定准备1 .准备好待测样品，例如细胞裂解悬液等，置于冰槽里备

6、用2 .设定好荧光酶标仪（25*C）:激发波长345nm,散发波长51Onm二、荧光测定1 .准备1个黑色96孔板，标记为：样品孔、空白对照孔、最大对照空2 .移取100微升（20微克蛋白）样品到样品孔里3 .移取XX微升饱和液（ReagentD）到最大对照空里4 .移取XX微升阴性液（ReagentE）到空白对照空5 .分别加入100微升反应液（ReagentC）到所有孔里6 .轻轻摇动黑色96孔板，混匀7 .室温下（25C）,孵育30分钟，避免光照8 .即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（re1ativef1uorescenceunit；RFU）9 .计算样品钾离子浓度（注意：不要遗忘乘上稀释倍数）注意事项1 .本产品为20次操作2 .操作时，须戴手套3 .孵育反应完成后即刻进行荧光测定4 .用户可以选择激发波长340至380nm,散发波长450至550nm的任一波长进行检测5 .如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度6 .样品浓度可以按照细胞数或蛋白量定义7 .本公司提供系列钾生化检测试剂产品质量标准1 .本产品经鉴定性能稳定2 .本产品经鉴定检测敏感