大肠菌群的测定方法操作规程.docx

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1、大肠菌群的测定方法操作规程1培养基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白冻肉汤，煌绿乳糖胆盐肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂，无菌生理盐水2操作步骤2.1样品的稀释：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。用1 mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1 mL,沿管壁缓缓注入9 mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL

2、无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15 min02.2选取2个3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mLo同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。2.3及时将15 mL20 mL冷至46C的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36C1C培养24h48 ho3平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm或更大。4证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36C1C培养48h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。5大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以4.4中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g （mL）样品中大肠菌群数。