水质环境激素类化合物的测定固相萃取液相色谱串联质谱法.docx

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1、水质环境激素类化合物的测定固相萃取-液相色谱-串联质谱法警告：实验中使用的溶剂和试剂均具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，应尽量避免与这些化学品的直接接触。样品制备过程应在通风橱中进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。1范围本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中的环境激素类化合物的固相萃取-液相色谱-串联质谱法。本标准适用于生活饮用水及其水源水的17B雌二醇、雌三醇、17-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四浪双酚A、雌酮、己烯雌酚、三氯生和三氯卡班等11种环境激素类化合物的测定。若取水样IOOOn11,浓缩至In11,则方法检出限分别为：17B雌二醇、雌三醇、17a

2、-快雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四溪双酚A均为2ng1,雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班均为0.2ng/1；测定下限分别为：176雌二醉、雌三醉、17a-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四浸双酚A均为8ng/1,雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班均为0.8ng/1。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5750.22006生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存GB/T5750.3-2006生活饮用水标准检验方法水质分析质量控制GB/T324

3、65化学分析方法验证确认和内部质量控制要求GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法HJ/T91地表水和污水监测技术规范HJ/T164地下水环境监测技术规范3方法原理本方法采用固相萃取柱对水中的11种环境激素类物质进行浓缩富集，用洗脱液（二氯甲烷/丙酮）洗脱保留在萃取柱上的环境激素类物质，然后用液相色谱-串联质谱仪进行定性和定量分析。4试剂和材料4.1 固相萃取柱：H1B（6m1,200mg）或等效固相萃取柱。4.2 高纯水：水质满足GB/T33087的规定。4.3 硫酸（H2SO4）：优级纯。4.4 二氯甲烷（CH2CI2）：色谱纯。4.5 丙酮（CH3COCH3）：色谱纯。4.6 教

4、气：高纯氮（99.999%）。4. 7乙睛（C2H3N）：色谱纯。4.8 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.9 环境激素类标准物质：17B-雌二醇、雌三醇、17-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四溟双酚A、雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班等标准物质，纯度298%,有证标准物质。4.10 7种环境激素的标准贮备液：p=10.0mgU分别称取一定量17B-雌二醇、雌三醇、17-快雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四漠双酚A的标准品（4.9）,用甲醇（4.8）溶解并稀释成浓度为IOmg/1的标准贮备液，于4以下冷藏密封避光保存。4.11 4种环境激素的标准贮备液：P=1OIng/1称取一定量的

5、雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班（4.9）的标准品，用甲醇（4.8）溶解并稀释成成浓度为1Omg/1的标准贮备液。4.12 7种环境激素的标准使用液：P=1.0mgU取IOOOu117B-雌二醇、雌三醇、17一块雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四溟双酚A的标准贮备液（4.10）,用甲醇（4.8）稀释并定容至IOn11,配制1mg/1的标准使用液。于4以下冷藏密封避光保存。4.13 4种环境激素的标准使用液：P=0.1mg/o取IOOOU1雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班的标准贮备液（4.11）,用甲醇（4.8）稀释并定容至IOm1,配制0.1mg/1的标准使用液。于4C以下冷藏密封避光保存

6、。5仪器和设备5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2 色谱柱：加填料或者等效色谱柱。5.3 固相萃取装置。5.4 氮吹浓缩装置。5.5 样品瓶：2m1,棕色玻璃瓶。5.6 采样瓶：棕色玻璃瓶，具玻璃塞。5.7 微量注射器：IooU1和IOooH15.8 容量瓶：IOm1o6样品6.1 样品采集与保存按照HJ91和HJ/T164的相关规定采集样品。用采样瓶（5.6）采集样品。按照GB/T5750.22006的相关规定贮存样品。样品采集后在4C下冷藏避光保存，24h内完成前处理，7d内完成样品分析。若水样中存在残留氯，加入抗坏血酸去除余氯。6.2 试样制备6.2.1 活化依次用6m

7、1甲醇（4.8）、6m1高纯水（4.2）对固相萃取柱（4.1）进行活化。6.2.2样品富集量取IoOom1水样，加入硫酸（4.3）调节PH为5左右，以IOnI1min流速通过活化后的固相萃取柱，完成固相萃取富集。6. 2.3淋洗用IOm1高纯水（4.2）以IOm1min流速淋洗萃取柱，淋洗完成后用氮气吹干。6. 2.4洗脱用IOIn1二氯甲烷（4.4）/丙酮（4.5）（V:V=7:3）以Im1min流速洗脱吸附在固相萃取柱上的被测组分，收集洗脱液至浓缩管，氮气吹至近干，用Im1乙精（4.7）/高纯水（4.2）（V:V=3:2）定容，保存在样品瓶（5.5）中待测。6.3 空白试样制备用高纯水（4

8、.2）代替样品，按照与样品（6.2）相同的步骤制备空白试样。7分析步骤6.4 液相色谱条件7. 1.1流动相：A相乙月青（4.7）,B相高纯水（4.2）。7.1.2洗脱模式及洗脱流速：采用梯度洗脱，洗脱速率为0.2m1min,洗脱条件如表1所示。7.1.3柱温：40eCo7.1.4进样体积：201,表1流动相梯度条件时间minA相%B相%06040395549554.160401560407.2 质谱条件7.2.1 离子源：电喷雾离子源，负离子模式。7.2.2 离子源温度：350eCo7.2.3 扫描方式：MRM,多反应监测条件见表2。表2质谱参考参数设置扫描时间物质名称母离子子离子Fragm

9、entVCEV0min17B一雌二醉271.2183,18540145m18540表2质谱参考参数设置(续)扫描时间物质名称母离子子离子FragmentVCEV0min17a-焕雌醉295.2159,18036145-18040雌三醇287.2171903814319055雌酮269.2183,18540145-18538己烯雌酚267.2251*14520237”14525双酚A227.22114030133口140354min四嗅双酚A538.8443.8,14035415.9-14045三氯卡班313160,IOO10126”IOO25三氯生28735*7557.5min壬基酚219.2

10、147.14020133口140204-正辛基酚205.2106,120157.3 注：带*为定量离G带*为定性离f。7.4 校准曲线的绘制7.5 3.1本方法使用外标法定量。7.3.2校准系列的配制:取6个IOin1容量瓶,依次准确加入0.08m1、0.10m1、0.20m1、0.40m1、0.80m1、1Oom1的17B-雌二醇、雌三醇、17-怏雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四漠双酚A的标准使用液(4.12)和雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班的标准使用液(4.13),用乙月青(4.7)/高纯水(4.2)(V:V=3:2),定容至刻度,配制成浓度为8gU10g/1、20g1.40g1.

11、80Ug/1、100Ug/1的17B-雌二醇、雌三醇、17a-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四溟双酚A和0.8ug/1、1Ug/1、2Ug/1、4g/1、8Ug/1、10Ug/1的雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班校准系列溶液。7. 3.3按照浓度从低到高的顺序上机测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制校准曲线。7.4 样品测定1. 4.1采用自动进样器进样，进样量为2017. 4.2将6.2处理后的试样上机测定。8. 4.3环境激素类化合物的MRM色谱图见图1所示。1OX1O1O-S7M二k1900VCDS-2872-IT1S3-ESIMRM*ag-185.0VC040.0：Z71

12、2145.0-ESIMRM-rg-1B5VCD2400(2712-183)+SVQP=f-13WCOS80292-17。4-ESIMRM=k185.WCQJOSQ(2892-183。3-ESIMRMrag-190,VCO-(2872-1430：-ESIMRM=39-145WCOg-272-2370;图1各类环境雌激素的MRM谱图x102-ESIMRMFrag=140.0VC1D-(538.S-4433)5-3t1051111512125图1各类环境雌激素的MRM谱图（续）7.5 空白试样测定按照与样品测定（7.4）相同的步骤进行空白试样（6.3）的测定。8结果计算与表示8.1 定性结果根据环境

13、激素类物质MRM色谱图中的保留时间和特征离子对进行定性分析。8.2 定量结果根据定量离子的峰面积外标法定量。样品中环境激素类物质的质量浓度PX按照公式（1）计算，测XX果位数的保留与测定下限一致，最多保留三位有效数字。/X二（1）式中：P，一一样品中组分质量浓度，单位为微克每升（ug1）；PQ一一固相萃取洗脱液质量浓度，单位为微克每升（ug1）；Vt固相萃取洗脱液浓缩后定容体积，单位为毫升（m1）；Vs水样体积，单位为毫升（m1）O9精密度和准确度9.1 精密度3家实验室分别对17B-雌二醇、雌三醇、17Q-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四漠双酚A、雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班等1

14、1种环境激素进行低、中、高浓度的纯水、地表水、地下水、出厂水和管网水加标样品进行测定，实验室内的相对标准偏差为1.2%26%,参见附录表A.1表A.2。9.2 准确度3家实验室分别对17B-雌二醇、雌三醇、17-焕雌醇、壬基酚、4-正辛基酚、双酚A、四溟双酚A、雌酮、己烯雌酚、三氯生、三氯卡班等11种环境激素进行低、中、高浓度的地表水、地下水、出厂水和管网水加标样品进行测定，加标回收率为73.1%96.2%,参见附录表A.1表A.2。10质量保证和质量控制10.1 空白试验每批样品应做空白试验，测XX果不能超过方法的检出限。10.2 校准曲线要求分析样品之前，应建立能够覆盖样品浓度范围的至少6个浓度点的校准曲线，曲线的相关系数/应大于0.995o10.3 平行样平行双样测XX果的相对偏差满足GB/T5750.32006的要求。10.4 基体加标基体加标样品的加标回收率范围满足GB/T32465的要求。附录A（资料性附录）方法的精密度和准确度表A.17种环境激素类化合物的精密度与准确度样品加标量ng/1加标回收率%实验室内相对标准偏差%四浪双酚A雌三醇