蔬菜中羟基百菌清残留量的快速测定液相色谱串联质谱法.docx

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1、蔬菜中4-羟基百菌清残留量的快速测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了蔬菜中4-羟基百菌清(参见附录A)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于蔬菜中4-羟基百菌清残留量的快速测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用乙脯匀浆提取，盐析离心后，取上清液，过滤后用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水

2、为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙1(CH3CN,75-05-8)4.1.2甲醇(CH3OH,67-56-1)。4.1.3甲酸(CH2O2,64-18-6)。4.1.4醋酸筱(C2H7NO2,631-61-8)。4. 1,5氯化钠(NaC1,7647-14-5),分析纯，140烘烤4h。4.2溶液配制0.1%甲酸+5o11醋酸筱水溶液：称取0.385g醋酸筱于50Om1烧杯中，用水充分溶解后，准确加入Im1甲酸，将上述溶液转移至IoOOm1容量瓶中，用水定容，现用现配。4. 3标准品4-羟基百菌清标准品：纯度298%,标准品信息参照附录A。4.4标准溶液配制4.4.1

3、标准储备溶液准确称取适量（精确至OJmg）4-羟基百菌清标准品于IOm1容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成IoOOmg/1的标准储备溶液（或购买有证标准储备溶液），0C4C保存，保存期为6个月。4.4.2中间标准溶液准确吸取适量的标准储备溶液（4.4.1）,用甲醇稀释配制成IOmg/1的4-羟基百菌清中间标准溶液,04保存，保存期为2周。4.4.3标准工作溶液准确吸取适量的中间标准溶液（4.4.2）,用空白样品基质溶液稀释配制成所需浓度的标准工作溶液，现用现配。4.5材料微孔滤膜：有机系，0.22mo5仪器和设备5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾负离子源（ES）o5.2 分析天平：

4、感量分别为0.000O1g和0.01g。5.3 组织捣碎机。5.4 旋涡混合器。5.5均质器：转速不低于15000r/min。5.6离心机：转速不低于5000r/min。6试样制备蔬菜样品取样部位按GB2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理：对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放入洁净的样品盒内，密封并做好标记。将样品于-18以下冷冻保存。7分析步骤7.1 提取称取15.Og试样（精确至

5、OJg）于IOom1离心管中，加入30m1乙盾，用均质器在12000r/min匀浆提取2min,加入6g氯化钠,再振荡提取InIirb4200r/min离心5min,取上清液约2mb,用0.22阿滤膜过滤，待测。7.2 测定7.2.1 液相色谱一串联质谱参考条件参考条件如下：a）色谱柱：Shim-packXR-ODSIII色谱柱，502.0mm（i.d.）,1.6Hnb或相当者;b）流动相：A为0.1%甲酸+5InmoI/1醋酸铉水溶液（4.2）,B为甲醇，梯度洗脱程序见表1；流速：0.35m1/min：c）柱温：40；d）进样体积：10.0P1；e）扫描方式：负离子模式；f）检测方式：多反应

6、监测（MRM）,多反应监测条件参照附录B；g）加热块温度：400eC；h）脱溶剂管（D1）温度：250；i）干燥气（N2）流速：15.0Imin,纯度299.999%；j）雪化气（凡）流速：3.01min,纯度299.999%；k）电喷雾负离子源（ESr）接口电压：-3.5kV;1）检测器电压：1.74kV；m）碰撞气（Ar）压力：0.23MPao表1梯度洗脱程序时间min%B%0.590102.050505.050509.059511.559513.09010注：以上质谱条件是在SHIMADZU1CMS-8040质谱仪上完成的，列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使

7、用者尝试采用不同厂家或型号的仪。7.2.2定性测定被测试样中4-羟基百菌清色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在2.5%之内。在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与基质标准工作溶液相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，4-羟基百菌清的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，样品中4-羟基百菌清的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准工作溶液相比,其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在4-羟基百菌清。表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%至50%10%至20%10%允许相对偏差20%25%30%

8、50%7.2.3定量测定本方法采用外标法单定量离子对定量测定，定量用标准溶液采用基质标准工作溶液。在仪器最佳工作条件下，对基质标准工作溶液进样，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中4-羟基百菌清响应值均应在仪器测定的线性范围。本方法的4-羟基百菌清标准物质多反应监测色谱图参照附录A,质谱图参照附录C。7.3 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.4 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行测定。8结果计算和表述液相色谱-串联质谱测XX果可由计算机按外标法自动计算，也可按式(1)计算：/=Tm式中：3质量分数，指试样中4-羟基百菌清残留量，单位为亳克每千克(mgkg)：

9、P从标准工作曲线上得到的试样中4-羟基百菌清的质量浓度，单位为亳克每升(mg1)：V提取溶剂总体积，单位为亳升(m1)；m试样的质量，单位为克(g);计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，保留两位有效数字，含量超过1mgkg时保留三位有效数字。9精密度9.1在重复性条件下获得的两次独立测XX果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率)，应符合附录E的要求。9.2在再现性条件下获得的两次独立测XX果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率)，应符合附录F的要求。10定量限和回收率10.1定量限本方法的定量限(1OQ)参照附录A。10.2回收率当添加水平为

10、1O0、5X1OQ、IOX1OQ时，添加回收率参照附录D。附录A（资料性附录）4-羟基百菌清中英文名称、分子式、CAS号、保留时间、定量限和标准物质多反应监测色谱图4-羟基百菌清中英文名称、分子式、CAS号、保留时间和定量限，参照表A.1。标准物质色谱图，参照图A.1。表A.14-羟基百菌清中英文名称、分子式、CAS号、保留时间和定量限序号中文名称英文名称分子式CAS号保留时间min定量限mg/kg14-羟基百菌清4-hydroxych1orotha1oni1CsHC13N2O28343-61-56.910.01附录B（资料性附录）4-羟基百菌清监测离子对、碰撞能量和碎裂电压4-羟基百菌清监测

11、离子对、碰撞气能量和碎裂电压，参照表B.1。表B.14-羟基百菌清监测离子对、碰撞能量和碎裂电压序号化合物名称电离模式母离子子离子Q1/VCE/VQ3/V相对离子强度/%14-羟基百菌清-245175427252971.8210112512注：“-”代表负离子模式，“*”旨定量离子，Q1”和“Q3”分别指质谱仪碰撞池前端和后端四极杆预杆偏置电压，“CE”指碰撞池电压，”相对离子强度指定性参考离子与定量离子强度比。附录C（资料性附录）4-羟基百菌清标准物质多反应监测（MRM）质谱图4-羟基百菌清标准物质多反应监测（MRM）质谱图，参照图C.1。图C.14-羟基百菌清标准物质多反应监测（MRM）质

12、谱图附录D（资料性附录）4-羟基百菌清在6种蔬菜中的添加回收率4-羟基百菌清在6种蔬菜中的添加回收率，参照表D.1。表D.14-羟基百菌清在6种蔬菜中的添加回收率化合物名称添加水平mg/kg菠菜%近豆%番茄%甘蓝%黄瓜%韭菜%4-羟基百菌清0.017086739186937386809171910.058096809276967688809280920.18898829878967810078917987附录E（规范性附录）实验室内重复性要求实验室内重复性要求如表E.1所示。表EJ实验室内重复性要求被测组分含量mg/kg精密度%WO.001360.OO1WO.01320.010.1220.1118114附录F（规范性附录）实验室间再现性要求实验室间再现性要求如表F.1。表FJ实验室间再现性要求被测组分含量mg/kg精密度%0.OO1540.OO1WO.01460.010.1340.IW125119