抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂注册技术审查指导原则（2020年 ）.docx

《抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂注册技术审查指导原则（2020年 ）.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂注册技术审查指导原则（2020年 ）.docx（24页珍藏版）》请在第一文库网上搜索。

1、抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指

2、导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围从方法学考虑，在本文中抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂盒是指采用化学发光免疫分析技术，利用全自动、半自动化学发光免疫分析仪，对人血清或血浆等样本中抗甲状腺过氧化物酶抗体的含量进行体外定量分析的试剂。化学发光免疫分析法主要有直接化学发光、电化学发光、酶促间接化学发光等。根据体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第5号）和食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知（食药监械管（2013）242号），抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂

3、盒的管理类别为二类，分类代码为6840o本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。本指导原则不适用于：（一）单独申请注册的抗甲状腺过氧化物酶抗体校准品和质控品。（二）化学发光免疫分析法原理之外的其他抗甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂盒。二、注册申报资料要求（一）综述资料甲状腺过氧化物酶（thyroidperoxidase,TPO）,是催化甲状腺激素的重要酶，由甲状腺滤泡细胞合成。其主要成分是由933个氨基酸残基组成的分子量103kD的10%糖化的血色素样蛋白质，表达在细胞表面，在滤泡腔面的微绒毛处分布最为丰富。该酶可与甲状腺球蛋白（Thyrog1obU1in,Tg）协同作用将1-酪

4、氨酸碘化，并将一碘酪氨酸和二碘酪氨酸联结成为甲状腺激素T4、T3和IT3。TPO也是自身免疫性甲状腺疾病一种重要的自身抗原，可以刺激机体免疫系统产生抗TPO抗体（AntibOdieStothyroidperoxidase,Anti-TPO）oAnti-TPO作为自身免疫性甲状腺疾病一种主要的自身抗体，可通过激活补体、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用和致敏的T杀伤细胞直接杀伤等作用机制，引起甲状腺滤胞损伤，间接的抑制甲状腺素的合成，导致甲状腺功能减退。检测该类抗体的主要适用症为自身免疫性甲状腺疾病（包括突眼性甲状腺肿和桥本甲状腺炎等）。Anti-TPO抗体主要以IgG类为主，该抗体主要见于自身免疫性

5、甲状腺病，如桥本甲状腺炎（阳性率85%100%）、GraVeS病（阳性率65%）、原发性黏液性水肿患者；也见于其他器官特异性自身免疫病，如1型糖尿病（阳性率14%）、AddiSon病（阳性率31%）、恶性贫血（阳性率55%）及产后甲状腺炎（阳性率15%）等。目前认为，Anti-TPO抗体为人类自身免疫性甲状腺炎较理想的标志抗体，阳性结果可用于自身免疫性甲状腺疾病的辅助诊断。综述资料应主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性方面的说明、研究结果的总结评价以及同类产品在国内外上市情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学、临床应用情况、申报注册产品与目前市场上已获批准的同类产

6、品之间的异同方面进行介绍。应符合体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第5号）和关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。（二）主要原材料研究资料（如需提供）1所用抗原/抗体的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料。如抗原/抗体为申请人自制，则应详述抗原/抗体的名称及生物学来源，申请人对该抗原/抗体技术指标的要求（如外观、纯度、蛋白浓度、效价等），且其生产工艺必须相对稳定，并对其工艺有相关的验证。同时确定该抗原/抗体作为主要原材料的依据和质量标准；如为申请人外购，则应详述其名称及生物学来源，外购方名称

7、，提交外购方出具的抗原/抗体性能指标及检验证书，详述申请人对该抗原/抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据。2 .质控品（如有）的原料选择、制备、定值过程及试验资料。3 .申请人应根据GB/T214152008/ISO17511：2003体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性提供所用校准品的来源、赋值过程和相应指标、以及不确定度等内容。明确校准品的质量标准并提供校准品的溯源性文件，校准品应溯源至现行的国家标准品或国际标准品。（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）生产工艺主要包括：各组分制备工艺的研究，包括试剂的配方及工艺关键参数的确

8、定依据等。反应体系主要包括：反应条件、样本用量、试剂用量等确定的依据。1主要生产工艺介绍，可以流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。4 .产品反应原理介绍。5 .抗原/抗体包被工艺研究：申请人应考虑如包被缓冲液及添加量、浓度、时间、温度等指标对产品性能的影响，通过试验确定上述指标的最佳组合。6 .体系反应条件确定：申请人应考虑反应模式、反应时间、反应温度、洗涤次数等条件对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。7 .体系中样本及试剂的加样方式及添加量确定：申请人应考虑样本加样方式、加样量以及试剂添加顺序、添加量对产品检测结果的影响，通过实验确定最佳的样本及试剂的添加方式和添

9、加量。如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测，申请人还应对可用于样本稀释的基质或处理方法进行研究，通过试验确定样本稀释基质或处理方法。确定反应所需其他试剂用量（校准品、标记物、底物等）的研究资料。（四）分析性能评估资料企业应提交产品研制阶段的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、质控标准、实验数据、统计分析等详细资料。建议选择不少于3批产品对以下分析性能进行研究，包括检出限、线性、准确度、重复性、批间差、特异性等指标。对于适用多个机型的产品，应提供产品说明书【适用仪器】项中所列的所有型号仪器的性能评估资料。如产品涉及不同包装规格，则需要提供每个包装规格在不同型号仪器上的

10、评估资料；如不同包装规格之间不存在性能上的差异，需要提交包装规格间不存在性能差异的说明。1准确度按以下优先顺序选择准确度性能评估方法，其结果应满足相关国际/国家及行业标准的要求：1.1 相对偏差根据企业提供的试剂盒线性区间，将有证参考物质或其他公认的参考物质，或由参考方法定值的人源性样品（可适当添加被测物，以获得高浓度的样品）作为样本，合理设置23个浓度，将其作为样本按照待测试剂盒说明书的步骤进行检测，每个样品重复测定3次，测试结果记为（Xi）,按式（1）分别计算相对偏差（Bi）。如果3次结果都符合要求,即判为合格。如果大于等于2次的结果不合格，即判为不合格。如果有1次结果不符合要求，则应重新

11、连续测试20次,并分别按照公式（1）计算相对偏差，如果大于等于19次测试的结果符合要求。Bi=（Xi-T）TX100%（1）式中：Bi相对偏差；Xi测量浓度；T标定浓度。注：优先考虑使用国家标准品或国际标准品、参考品。1.2 比对试验参考体外诊断试剂分析性能评估相关技术审查指导原则的要求完成准确度（方法学比对）评估。取不少于40个合理分布在线性区间内不同浓度的人血清或/和血浆样本，待测Anti-TPO试剂与生产企业选定的比对系统进行比对试验。每份样本按待测试剂及选定比对系统的要求分别进行检测，每份样本各测定1遍，用线性回归方法对两组结果进行线性拟合，得到线性回归方程的相关系数（r）和斜率，计算

12、各个样本的待测试剂测定值与比对系统测定值的绝对偏差或相对偏差。1.3 回收实验参考体外诊断试剂分析性能评估相关技术审查指导原则要求完成准确度（回收实验）评估。方法：选择接近参考区间的常规检测样本，分为体积相同的34份，在其中23份样本中加入不同浓度相同体积的待测物标准液制备待回收分析样本，加入体积小于原体积的10%,制成23个不同浓度的待回收分析样本，计算加入的待测物的浓度。在另一份样本中加入同样体积的无待测物的溶剂，制成基础样本。用待评价系统对待回收分析样本和基础样本进行测定，通常对样本进行3次重复测定，计算均值，取其均值进行下述计算，求得回收率。数据处理及结果报告：用公式（2）计算回收率：

13、DCX（VO+V）-CxVoVXC5（2）式中：R一回收率；V加入待测物标准液的体积；Vo基础样本的体积C一基础样本加入待测标准物质后的检测浓度；Co-基础样本的检测浓度；Cs待测物标准液的浓度。2 .检出限（1OD）申请人应评估空白限（1C）B）和检出限（1oD）o空白限的建立可使用检测零浓度校准品或样本稀释液的方法进行。例如重复测定20次，根据测量结果的平均值（M）和标准差（SD）,计算M+2SD及其对应的浓度值，结果应符合企业规定要求。检出限的确立可采用系列稀释参考品的方法进行。建议使用国际参考品/国家参考品进行梯度稀释并进行至少60次检测，95%以上的检测结果高于空白限作为检出限。最低

14、检出限应不高于12IUm10另外，应使用最低检出限或接近最低检出限水平的样本进行检出限的验证，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。3 .线性建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的人血清/血浆，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。建立一种定量测定方法的线性范围时，需在预期测定范围内选择711个浓度水平。例如，将预期测定范围加宽至130%,在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据实验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，确定线性范围。验证线性范围时，可以采用高浓度样本稀释的方法验证线性，将接近线性区间上限的高值样本按一定比例稀释为

15、至少5种浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限。按试剂说明书操作,对每一浓度的样本均重复检测不少于2次,计算其平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，计算线性相关系数r,应不低于0.9900,线性区间应不窄于12,400IUm1o4 .重复性重复性的评估应包括至少两个浓度水平的样本进行，两个浓度都应在试剂的测量范围内，且有一定的临床意义，通常选用该检测指标的正常参考值附近样本和病理高值样本，建议采用浓度为(306)IUm1和(20040)IUm1的样本。分别用不同浓度的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值（M）和标准差（SD）,根据公式（3）得出变异系数（CV

16、）。CV=SDM100%（3）5 .批间差用3个批号的试剂盒分别检测浓不同浓度（建议与重复性样本浓度的选择一致）的样本，各重复10次，计算每个浓度样本30次测量结果的平均值（M）和标准差（SD）,根据公式（3）得出变异系数（CV）,应不大于15%。6 .特异性推荐参考C1S1的EP7-A2临床生化干扰实验批准指南或WS/T416-2013干扰实验指南进行特异性评估。6.1 交叉反应：易产生交叉反应的其他抗体等的验证情况，应至少验证与抗甲状腺球蛋白抗体的交叉反应情况。6.2 干扰物质：样本中常见干扰物质对检测结果的影响，如血红蛋白、高脂、黄疸、类风湿因子、抗核抗体、嗜异性抗体、总蛋白以及说明书中声称其他的干扰物质对