新型冠状病毒核酸检测结果分析、报告与可疑、阳性结果复检审签程序.docx

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1、新型冠状病毒核酸检测结果分析、报告与可疑、阳性结果复检审签程1 .新型冠状病毒核酸检测报告管理小组组长：李四四（科主任、主管检验师）副组长：王五五（PCR室负责人、主管检验师）技术骨干：张三三（主管检验师）陈七七（检验师）林六六（检验师）成员：PCR室全体工作人员2 .新型冠状病毒核酸检测报告时限2. 1发热门诊、急诊患者6小时内出报告；2.2 普通门诊、住院患者及陪护人员，以及其他“应检尽检”人群原则上12小时内出报告；2.3 “愿检尽检”人群一般24小时内报告；2.4 检验科发现可疑、阳性病例要立即报告医务科、分管院领导、院长。3. PCR实验室检验结果报告的一般原则3.2 检测结果的报告

2、应准确、清晰、明确、客观和及时，杜绝虚假报告。3.3 实时荧光PCR测定时其数据要经分析，避免因非特异性荧光而造成假阳性结果。根据质控品判断PCR扩增的有效性，只有当质控品的扩增结果符合项目SOP有关条件时，才可发出报告，否则应重新测定。3.4 定性测定的检测项目其结果以“阴性”或“阳性”报告；定量测定的，结果报告为每毫升拷贝数（拷贝数/ml）,如结果高于测定方法线性范围上限，则对样本稀释后再测，结果乘上稀释倍数。如结果低于方法的测定范围下限，则直接报告低于检测下限。3.5 每份报告均应使用科内统一的打印报告专用纸打印；报告内容至少应包括:病人姓名、性别、年龄、及测定项目、结果、参考范围以及标

3、题、标本号、标本类型、标本接收日期和检测日期、实验操作者和审核者的签名、报告日期等。否则视为无效或虚假报告单。3.6 所有检测报告均需具有检测和审核资格的实验人员进行检查核对，报告单上具有检测人员和审核者员签字方可生效。3.7 报告单应及时发出。门诊患者报告单送至取单窗口，住院患者报告由实验室打印后经专门人员送至病房护理部，原则上不采用电话、图文传真、电子邮件等形式传送结果。3.8 如临床科室或者患者由于特殊情况且理由充分，耍求以上几种特殊形式发送报告，必须确认身份后（包括核对其所查询的患者姓名、性别、年龄、检测项目、送检医生、送检口期、病区床号等情况，并提供患者TD号），经实验室负责人同意后

4、才能发放报告。当需邮寄报告时，应由患者告知地址、邮政编码及E-Mail地址等。3.9 应明确告知杳询者，上述特殊情况报告均仅为临床提供参考，实验的最终结果以正式检测报告单为准。特殊情况报告的发放需详细登记，签署报告人姓名，实验室负责人签字。3.10 任何形式的报告等患者资料必须遵循医院患者临床病历资料保密原则，未经许可，一般人员不可查询或复印，特殊情况时必须在科主任或本室负责人同意的情况下方可查询。4.PCR实验室常见扩增曲线类型与分析处置程序1.1 标准的正常扩增曲线荧光阅值Cycle （循环数），a、曲线拐点清楚，特别是低浓度样本指数期明显，扩增曲线整体平行性好，基线平而无上扬现象，低浓度

5、样本扩增曲线指数期明显。b、曲线指数期斜率与扩增效率成正比，斜率越大扩增效率越高。c、标准的基线平直或略微下降，无明显的上扬趋势。d、各管的扩增曲线平行性好，表明各反应管的扩增效率相近。1.2 荧光定量PCR实验结果中无Ct值出现扩增曲线原始曲线2.520242 210831 901431.59202 1 282620973210.66381原因分析:a、PCR参数设置错误：在设计循环参数时没有设置荧光信号米集;b、模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况：c、引物或者探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；d、电脑设置了自动休眠。解决方案：按照原因分析进行一一核查，对症处理。1.

6、3 斜直线型扩增曲线PCR实验首次检测呈斜直线型扩增曲线，再次复检后结果基本均为正常阴性。原因分析：a、分液不准确，检查检测后的反应管可发现管内的PCR反应液量明显少于正常管；b、反应管气密性差，反应过程中溶液蒸发引起探针浓度增加，导致曲线呈斜直线状。解决方案：a、分液均匀，上机前检查八连管液面是否在同一水平线上；b、八连管盖盖严，上机前检查是否有缝隙。1.4 扩增曲线末尾起跳B W0eW51000e56 000eM55 00g0054 0Q53 0000052 0008M51 0Ogg1 W0t0QB 10 11 12 13 U 15 16 17 18 W 70 21 73 24 H V 2

7、8 29 30 31 A 33 34 35 3C ”泗PCR实验结果中有曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的现象。原因分析：a、阴参曲线末尾起跳，通常表示存在污染；b、复检样本，排除非特异性扩增的可能性；c、正常样本也可存在曲线末尾起跳，表示样本浓度低或者加样量不准确。解决方案：a、排除是否存在污染；b、排除污染原因后复检样本，如果复检后曲线为阴性直线则说明之前的末尾起跳为非特异性扩增，如果复检后曲线仍与之前一致则说明末尾起跳表示该样本中待检病毒核酸的浓度偏低。1.5 山域型曲线原因分析：严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线，轻微的蒸发会是一种缓慢的上升，这两类异常的曲线可以看一下检测后的反应管液

8、面是否有下降的现象来证明。解决方案：上机检测前检查八连管管盖，保证无缝隙后上机扩增。1.6 扩增曲线有向上或者向下的尖峰原因分析:a、仪器不稳定导致的扩增曲线异常（也可能突然停电或者电压不稳）；b、如果尖峰向下，可能是卤素灯老化所致发射光源不稳定（指卤鸨灯光源的激发器）c、如果是单一的孔位出现尖峰，除了考虑仪器或者孔位问题外，还要考虑反应体系是否有气泡所致。解决方案：按照原因分析进行一一核查，对症处理。5 .新型冠状病毒核酸检测结果分析程序5.1 实验结束后，默认打开实验结果，如果需要分析以前的数据，根据实验名称或者日期选择打开所需要的数据。5.2 选择所有检测结果，观察整体扩增曲线是否正常，

9、再观察分析阳性对照、弱阳性对照、阴性对照扩增曲线与CT值与预期是否相符，质控是否在控，内标是否符合要求，对符合要求的数据进入下一步分析。5.3 参照 YCXZYY/JYK-JL-SOP8-20-01 “ 附表 38.新型冠状病毒（2019-nCov） PCR 扩增结果分析与复检规则”对检验结果进行分析。5.4 对于需要复检的项目按YCXZYY/JYK-JL-PCR-015新冠核酸检测复检登记表格式登记，并按复检程序进行复检。6 .新型冠状病毒核酸检测阴性检测结果报告程序6.1 质控在控、扩增曲线正常的情况下，阴性结果按正常程序审核报告。7.新型冠状病毒核酸检测可保阳性结果复检、报告程序依据关于

10、印发大规模新冠病毒核酸检测实验室管理办法（试行）的通知（国务院联防联控机制综发（2021） 33号）、新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第八版）（国务院联防联控机制医疗发2（）2151号）、新型冠状病毒核酸检测工作手册第二版（国务院联防联控机制医疗发2020313号），为了更好执行国务院联防联控机制综发202197号“全员新型冠状病毒核酸检测组织实施指南（第二版）”中有关“逢阳必报”的要求，需坚持以下基本原则：a、“阳”是指检测实验室经过完整的报告程序用另外一到两种（不同厂家）更灵敏且扩增不同靶区域的试剂复检后确认的阳性结果。b、“初筛”是指第一个接样的实验室对样本的初次检测结果；C、“确认”是另

11、一个实验室对初次检测实验室报告阳性的被检者（单采、混管等）重采样本的复核、验证检测结果。无论上述哪一类的检测，对于阳性结果是否有效的判断均需分析中质控（第三方弱阳性质控、阴性和环评质控、内标）结果在控，同时需完成实验室内部复检程序，才能报告阳性结果。7.1检测后、扩增结果出来前的标本与提取后核酸保存7.11 为方便及时复检，避免反复冻融，检验结果出来前的检验标本暂时放在4保存，待检测结果出来后，再转移到70冰箱规范保存。7.12 为方便及时复检，提取后核酸放4保存，待检测结果出来后，再按新冠实验室相关管理规定处置。1.2 阳性结果报告具体流程如下：1.2.1 双靶阳性：典型“S型”扩增曲线，同

12、时Ct值在试剂盒说明书结果为阳性的范畴内（小于判定值）：（1）、如为混管，可判断为阳性结果，可直接、立即上报。混管阳性的标本，6个小时内完成单采标本的复核检测工作。（2）、如为单管，则用另外一到两种（不同厂家）更灵敏且扩增不同靶区域的试剂复检后,如仍为阳性，则报告；（3）、如可疑，重新采样检测或请其他实验室复核。722双靶阳性：非典型“S型”扩增曲线、或双靶Ct值在试剂盒说明书判读结果为灰区的范畴内(大于判定值的翘尾)，立即启动实验室内部复检程序:(1)、同靶区域的试剂进行复检。、二个试剂均阴性，重新提取核酸复核后再报告；、出现典型阳性或仍是灰区，报告阳性；、仍是非典型“S型”扩增曲线、或是一

13、阴一阳需重新采样检测或请其他实验室复核。(2)、重新提取核酸，用原试剂和另一种更灵敏且扩增不同靶区域的试剂对原样本平行检测，、二个试剂均阴性，报告阴性；、出现典型阳性或仍是灰区，报告阳性；、仍是非典型“S型”扩增曲线、或是一阴一阳需重新采样检测或请其他实验室复核。723单靶阳性：无论是典型“S型”扩增曲线，还是Ct值在试剂盒说明书判读结果为灰区的范畴内，均立即启动实验室内部复检程序：（1）、为节约时间，立即用原提取后的核酸加到另一种更灵敏且扩增不同靶区域的试剂进行复检。、二个试剂均阴性，重新提取核酸复核后再报告；、二种试剂均为单靶阳性，或者另一种试剂双靶阳性（包括灰区阳性），判断为阳性；、一阴

14、一阳需重新采样检测或请其他实验室复核。（2）、重新提取核酸，原试剂和另一种更灵敏且扩增不同靶区域的试剂对原样本平行检测。、二个试剂均阴性，报告阴性；、二种试剂均为单靶阳性，或者另一种试剂双靶阳性（包括灰区阳性），判断为阳性；、一阴一阳需重新采样检测或请其他实验室复核。1.3 常态化防控期间，实验室首例阳性需由其他实验室进行复核，建议不送检原样本（原标本可能由于采样或者实验过程已被污染），应重采样本，推荐咽和鼻各采一根置同一采集管送检。1.4 发热门诊或急诊的快速核酸检测结果为阳性：与上述常规检测一样，应使用另外12种更为灵敏且扩增不同靶区域的常规核酸检测试剂对原始样本或重采样本进行复检，复检确

15、认阳性方可报告结果。8 .新型冠状病毒核酸检测可疑、阳性结果讨论审签制度8.1 当报告人员按以上程序，发现可疑、阳性结果时，应立即上报科室主任，由科室“新型冠状病毒核酸检测报告管理小组”讨论分析，并立即上报医务科、分管院领导、院长,启动“新型冠状病毒核酸检测可疑、阳性结果处置应急预案:8.2 为避免误报假阳性结果，引起恐慌和社会资源的浪费，新冠核酸检测阳性和可疑报告必须由科室“新型冠状病毒核酸检测报告管理小组”组长、副组长与技术骨干讨论，科主任签名方可反馈报告。8.3 对于责任心不强，未对检测结果进行认真分析，未经讨论就把可疑、阳性报告发出的，将由院部和上级行政领导部门对其追责，并视结果造成影响对责任人进行处理。9 .相关记录9.