显微镜的七种观察方式(仪器设备操作使用技术资料).docx

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1、显微镜的七种观察方式一.明视野观看(BrightfieldBF)明视野镜检是大家比较熟识的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验,用于观看被染色的切片，全部显微镜均能完成此功能。明视野二.暗视野观看(DarkfieldDF)暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同，不直接观看到照明的光线，而观看到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现光明的象。暗视野的原理是依据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的状况下，人眼不能观看，这是由于强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射，微粒好像增大了体积，为人眼可见。m.m暗视野观看所需要的特别附件是暗视野聚光镜。它的特

2、点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线转变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的光明图象。暗视野观看的辨别率远高于明视野观看，最高达0.020.004暗视野三.相差镜检法(PhasecontrastPH)在光学显微镜的进展过程中，相差镜检术的创造胜利，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观看时很难观看到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不行辨别的相位差变为可辨别的振幅差，即使是

3、无色透亮的物质也可成为清楚可见。这大大便利了活体细胞的观看，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。相差图片相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清楚可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4（波长），假如再增加或削减1/4,则光程差变为1/2,两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于一般光学显微镜两个特别之处：1 .环形光阑（annulardiaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。2 .相位板（annularphase

4、plate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4。分为两种：1. A相板：将直射光推迟1/4,两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比四周介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。2. B相板：将衍射光推迟1/4,两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比四周介质更加变暗相差原理四.微分干涉称镜检术（DifferentialinterferencecontrastDIC）微分干涉镜检术消失于60年月，它不仅能观看无色透亮的物体，而且图象呈现出浮雕壮的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观看效果更为逼真。原理；微分干涉称镜检术是利

5、用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距微小，而不消失重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉。微分干涉图片DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜，技术设计要简单得多。DIC利用的是偏振光，有四个特别的光学组件：偏振器（polarizer）、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器（analyzer）。偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了偌玛斯斯棱镜,即DIC棱镜，此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光（x和y）,二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜

6、光轴平行的方向。最初两束光相位全都，在穿过标本相邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了其次个偌玛斯斯棱镜,即DIC滑行器，它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面（x和y）仍旧存在。最终光束穿过其次个偏振装置，即检偏器。在光束形成目镜DIC影像之前，检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从而使二者发生干涉。x和y波的光程差打算着透光的多少。光程差值为0时，没有光穿过检偏器；光程差值等于波长一半时，穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上，标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态，可通过调整DI

7、C滑行器的纵行微调来转变光程差，光程差可转变影像的亮度。调整DIC滑行器可使标本的微小结构呈现出正或负的投影形象，通常是一侧亮，而另一侧暗，这便造成了标本的人为三维立体感，类似大理石上的浮雕微分干涉原理图五.偏光显微镜（PolarizingmicroscopePOL）偏光显微镜的特点偏光显微镜是鉴定物质微小结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质，在偏光显微镜下就能辨别的清晰，当然这些物质也可用染色发来进行观看，但有些则不行能，而必需利用偏光显微镜。偏光显微镜的特点，就是将一般转变为偏光进行镜检的方法，以鉴别某一物质是单折射（各向同行）或双折射性（各向异性）。双折射性是晶体的基本特性。因此

8、，偏光显微镜被广泛地应用在矿物,化学等领域。在生物学和植物学也有应用。六.浮雕相衬显微镜（RCHMC）1975年，RobertHoffman博士创造2021年，专利到期，各显微镜厂家纷纷推出采纳以自己名义命名的RC技术产品原理斜射光照耀到标本产生折射、衍射，光线通过物镜光密度梯度调整器产生不同阴影，从而使透亮标本表面产生明暗差异，增加观看对比度特点提高未染色标本的可见性和对比度；图象显示阴影或近似三维结构而不会产生光晕；可检测双折射物质（岩石切片、水晶、骨头）；可检测玻璃，塑料等培育皿中的细胞,器官和组织；聚光镜的工作距离可以设计的更长；RC物镜也可用于明场，暗场和荧光观看七：荧光显微镜（FluorescenceMicroscopyFL）荧光镜检术是用短波长的光线照耀用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观看。荧光图象优点：检出力量高（放大作用）对细胞的刺激小（可以活体染色）能进行多重染色用途：物体构造的观看荧光素荧光的有无、色调比较进行物质判别抗体荧光等发荧光量的测定对物质定性、定量分析荧光原理图