20140612田家泽本科论文终稿修订版.docx

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1、石河子大学动物科技学院本科毕业论文中药复方宫炎净不同溶剂粗提物对小鼠抗炎活性的研究院（系）：动物科技学院专业：动物医学学号：2010513124姓名：田家泽指导教师：罗燕（副教授）新疆石河子2014.6摘要目的：通过中药复方宫炎净不同溶剂粗提物对小鼠抗炎活性的研究，筛选最佳提取溶剂及其抗炎剂量。方法：利用渗漉法对中药复方宫炎净进行粗提；取I1O只21日龄健康雌性小鼠随机均分为11组，分别给予生理盐水、地塞米松和高、中、低剂量的石油酸、70%乙醛、水粗提物，连续给药4天后，用二甲苯致炎，测定小鼠耳廓肿胀率；相同方法分组、给药，在最后一次给药30min后，每只小鼠右后足跖注射0.03m11%鸡蛋清

2、，4h后处死，取两后足跖称重计算足趾肿胀率；相同方法分组、给药，最后一次给药Ih后，每只小鼠尾静脉注射0.2m1质量分数为1%的伊文思兰溶液，然后腹腔注射0.7%的冰醋酸，于59Onm波长处测腹腔液OD值，测定毛细血管通透性；相同方法分组，肩胛部皮下植入棉球，次日起每天给药一次，连续20天，最后一次给药Ih后处死小鼠，取出棉球及周围肉芽肿烘干称重。结果：乙醇粗提物各剂量组的耳廓肿胀率、足趾肿胀率、腹腔液OD值、肉芽组织重极显著低于生理盐水组和石油酸、水粗提物各组(P0.01),且乙醇中剂量效果最佳。结论：70%乙醇可作为提取宫炎净有效成分的最佳粗提溶剂，并且以中剂量为最佳抗炎剂量。关键词：中药

3、复方宫炎净；粗提物；毛细血管通透性；耳廓肿胀率；足趾肿胀率；肉芽组织重AbstractObjectiveToscreenthebestextractionso1ventandanti-inf1ammatorydose,studytheimpactthatdifferentso1ventextractsoftraditiona1ChinesemedicinecompoundGongyanpingtotheanti-inf1ammatoryactivityinmice.MethodsThe21-day-o1dfema1emiceof110wererandom1ydividedinto11group

4、s,whichweregivensa1ine,dexamethasone,andhigh,medium,1owdosesofpetro1eumether,ethano1andwaterextractandinf1ammationwithxy1eneafter4daystodeterminatetheswe11ingrateofmouseear.Groupedandadministeredbytheabovemethod,eachmouseinject0.03m11%egg-inducedinf1ammationontherightreartoeafterthe1astadministratio

5、nof30min.thentakethetworightreartoeandweighttoca1cu1atetherateofswo11entoeafter4hdead1y;Groupedandadministeredbytheabovemethod,intraperitonea1injectthe0.7%aceticacid-inducedinf1ammationafterthe1astdose,measuringtheODva1uesofperitonea1f1uidatawave1engthof590nmandthecapi11arypermeabi1ity;Groupedbythea

6、bovemethod,Cutthescapu1arskinandsutureafterputtingcottonimp1antedsubcutaneous;Startfromthesecondday,administeredoncedai1yfor20daysandthe1astadministrationthemiceweresacrificedafter1h.1ast1y,removethecottonba11andsurroundinggranu1ationtissue.Atthesametime,dryingandweightedthetissuegranu1ation.Resu1ts

7、Earswe11ingrateofethano1extractobjectsineachdosegroup,peritonea1f1uidODva1ues,granu1ationtissueweight,pawedemaweresignificant1y1owerthanthegroupsofsa1ineandpetro1eumether(P0.01).Conc1usionThestudyshowedthat70%ethano1canbeusedasthebestextractionso1ventthatextractedthenetactiveingredientofGongyanping,

8、andtheanti-inf1ammatoryeffectofethano1mediumextractionisbetter.Keywords:ChinesemedicinecompoundGongyanjing;Extract;Earswe11ing;Mousetoeswe11ingrate;GranuIomacausedbytampons;CaPinary;Penneabi1ity1材料与方法111材料1试验动物1试剂与药品1试验仪器11.2试验方法21.2.1中药复方宫炎净不同溶剂粗提物的制备2小鼠耳廓肿胀率测定2小鼠足趾肿胀率测定21.2.3小鼠腹腔毛细血管通透性测定2小鼠棉球肉芽肿重

9、测定31.2.5数据处理32结果32.1中药复方宫炎净不同溶剂粗提物制备结果32.2小鼠耳廓肿胀试验结果32.3小鼠足趾肿胀试验结果42.4小鼠腹腔毛细血管通透性试验结果42.5小鼠肉芽肿试验结果53讨论与结论63.1中药复方宫炎净不同溶剂粗提物制备讨论与结论63.2急性炎症试验讨论与结论63.3慢性炎症试验讨论与结论73.4最佳给药剂量讨论与结论73.5全文结论7参考文献7致谢9中药复方宫炎净不同溶剂粗提物对小鼠抗炎活性的研究天然中草药在我国资源丰富，一般无耐药性或耐药性较小,对动物作用多以提高机体免疫力和增强体质为主，更适应新的疾病谱的变化趋势。中药复方是中兽医用药的主要形式，肖兵南等采用

10、用益母草、赤芍等13味中草药经水或乙醇提取有效成分配制成复方中药子宫灌注剂“清宫促情灵“治疗各种奶牛子宫内膜炎，疗效显著。石河子大学动物科技学院中兽医实验室根据中药复方君臣佐使、辨证论治组方原则，采用益母草、五灵脂、红花、肉桂等中药，研制了中药复方宫炎净，经临床实践效果显著，但是传统的散剂用量大，不利于临床实际操作。本实验通过中药复方宫炎净石油醒、乙醇、水三种溶剂粗提物对小鼠耳廓肿胀率、足跖肿胀率、毛细血管通透性、肉芽肿重的测定，筛选最佳提取溶剂及其最佳抗炎剂量，为复方宫炎净的进一步研究和研发新剂型奠定基础。1材料与方法材料1.1.1试验动物21日龄、体重（202）g的健康雌性小鼠440只，购

11、自石河子大学实验动物中心。试剂与药品中药复方宫炎净（石河子大学动物科技学院中兽医实验室提供）；地塞米松磷酸钠注射液（河南润宏制药有限公司，120609D；伊文思兰（EvansB1ue,美国Fk1ka）；1%鸡蛋清；二甲苯、冰醋酸、70%的乙醇、石油酸等均为国产分析纯。试验仪器精密电子天平（BS423S,北京赛多利斯仪器系统有限公司）；TD1-5离心机（Z36HK,上海安亭科学仪器厂）；循环水式真空泵（SH-C,河南巩义市英峪予华仪器厂）；旋转蒸发器（RE-52,上海亚荣生化仪器厂）；202型电热恒温干燥箱（202JES,北京市永光明医疗仪器厂）；BiotekSynergeyTM2多功能酶标仪（

12、550,Bio-Rad）。12试验方法1. 2.1中药复方宫炎净不同溶剂粗提物的制备取中药复方宫炎净3份，每份均为50g,分别用IOOm1石油酸、70%的乙醇、蒸馈水浸泡中药复方宫炎净，24h后装柱，以2m1s的速度渗漉48h,期间各组分别再加入400m1的石油酸、70%的乙醇和蒸馈水。收集各组渗漉液，用旋转蒸发器浓缩至50m1o12.1小鼠耳廓肿胀率测定取21日龄、体重（202）g的健康雌性小鼠110只，随机均分为11组，分别为：石油酸粗提物高剂量组（0.15m1/只）、石油酸粗提物中剂量组（0.10m1/只）、石油酸粗提物低剂量组（0.05m1/只），乙醇粗提物高剂量组（0.15mI只）、

13、乙醇粗提物中剂量组（0.10m1/只）、乙醇粗提物低剂量组（0.05m1只），水粗提物高剂量组（0.15m1/只）、水粗提物中剂量组（0.10mI只）、水粗提物低剂量组（0.05mI只）、空白对照组（生理盐水，0.10m1只）；阳性对照组（地塞米松硫酸钠注射液，每只皮下注射0.5m1）o在正常饲喂的基础上，连续给药4天（一次/天），在最后一次给药Ih后，左耳两面均涂抹0.05m1的二甲苯，右耳不涂为正常耳，20min后，将小鼠脱颈椎处死，用打孔器打下左耳和右耳同一部位的圆片于电子天秤称重，按如下公式计算小鼠耳肿胀率：鼠耳肿胀率=（左耳-右耳）/右耳X1o0%。小鼠足趾肿胀率的测定110只小鼠用

14、相同的方法分组给药，最后一次给药30min后，分别给每只小白鼠右后足用Im1注射器皮下注射1%鸡蛋清（0.03m1/只），4h后处死小鼠，从踝关节处切下两后足于电子秤称重，计算小鼠足趾肿胀率：肿胀率=（右后足重-左后足重-致炎剂重）/左后足重X1Oo%。1.2.3小鼠腹腔毛细血管通透性测定110只小鼠用相同的方法分组给药，最后一次给药Ih后，每只小鼠尾静脉注射0.2m11%的伊文思兰溶液，然后腹腔注射体0.7%的冰醋酸溶液（0.1m1/10g）致炎，20min后脱颈处死小鼠，用0.9%的生理盐水冲洗腹腔（5m1只），并收集腹腔液，用离心机在I（XM）r/min离心5min,取上清液，用紫外分光

15、光度计于590nm波长处测OD值。小鼠棉球肉芽肿重的测定I1O只小鼠用相同的方法分组，用乙醛将小鼠麻醉后，在无菌条件下用手术刀切开肩胛部皮肤，将棉球(0(X)5g,实验前以电子天平精确称量，常规高压灭菌后备用)植入皮下并缝合，手术后第二天开始给药，连续给药20d,每天1次,最后一次给药Ih后颈椎脱臼法处死小鼠，剪开术部皮肤，用手术锻小心取出棉球及周围肉芽组织，置烘干箱在60C条件下干燥24h,用天平准确称量。根据如下公式计算棉球肉芽肿重量：肉芽肿重=棉球肉芽60C干燥质量棉球质量。数据处理试验数据采用SPSS18.0统计软件进行分析，结果用“平均数土标准差”表ZjSo2结果2.1中药复方宫炎净不同溶剂粗提物制备试验结果利用渗漉法对中药复方宫炎净进行粗提，经过旋转蒸发浓缩至50n1,最终得到相当于原药Ig/m1的中药复方宫炎净水、70%乙醇、石油酸粗提物。2. 2小鼠耳廓肿胀试验结果表1各组小鼠耳廓肿胀率组别小鼠数量剂量m1只肿胀率石油酸提取物高剂量组100.151.0290.052a石油酸提取物中剂量组100.101.0150.048aA石油酸提取物低剂量组100.051.0820.0533a乙静提取物高剂量组100.150.5870.035b乙醇提取物中剂量组10