人类免疫缺陷病毒（酶联免疫法）标准操作程序SOP文件.docx

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1、文件编号：ABCD-SOP-01-39ABCD医院版序：ABCD页码：第1页，共2页HIV实验室人类免疫缺陷病毒（HIV）l+2型抗体（EUSA）原理本实验采用双抗原夹心ELISA方法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体。酶联板用HIV-1+2型抗原包被，待测血清中的抗HIV抗体与包被抗原反应，再与酶标HIVT+2型抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据0D值判断有无HIV抗体的存在。试剂厂家丽珠集团丽珠试剂厂。试剂组成4 . HIV阴阳对照5 .底物液A. B6 .终止液1. HIV微孔板2. HIV酶标抗原3. 浓缩洗涤液试剂的稳定性

2、与贮存试剂自生产日起避光贮存于2-8,有效期内（六个月）稳定。标本的收集与处理标本为新鲜无溶血血清或血浆。操作步骤1 .取出试剂盒平衡至室温，将浓缩洗涤液用蒸溜水或去离子水按1： 19稀释后备用。2 .取出HIV抗原包被板,每次试验设空白对照1孔，阴阳对照各2孔.除空白对照孔外，分别加入HIV阴阳对照各50ul ,其余孔加入待检血清各50ul。置于37 C温育30分钟。3 .用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完毕后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。4 .分别在每孔加入酶标记物50ul （空白孔除外），轻柏混匀，置于37 C温育30分钟o5 .用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完毕后扣干（每次应保持30

3、-60秒的浸泡时间）。ABCD医院HIV实验室版序：ABCD人类免疫缺陷病毒（HV）l+2型抗体（EUSA） 页码：第2页，共2页6 .每孔加入底物液A.B各50ul ,轻拍混匀，置37 C避光显色30分钟.7 .显色完毕后，每孔加入终止液50ul ,轻拍混匀，立即以空白孔调零,置酶标仪450n波长测定0D值.结果判断1,阴阳性对照和被检样本的0D值减去空白对照0D值即为计算值.2,若阴性对照0D均值小于0. 02按0. 02计算.3,临界值（cut off值）的设定：cut off值二阳性对照均值X 0.10+阴性对照0D均值4,被检样本的0D值二临界值应判为HIV抗体阳性反应,临界值为阴性反应.待测样本的0D值=临界值判为HIV抗体阳性,应重新取样双孔复试,复试阳性者应按照全国HIV检测管理规范送HIV确认实验室进行确认实验.质量控制为确保测试结果准确可靠,每批测试均应放置阳性质控血清与被检样品同时测试，用以检查试剂性能。临床意义人体受到免疫缺损病毒（HIV）感染后，试验呈阳性反应，如男性同性恋、静脉药瘾者（吸毒者）、血友病患者、艾滋病人的配偶。个别献血员中也有阳性反应的报告。