2023布鲁氏菌的实验室检查.docx

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1、2023布鲁氏菌的实验室检查布鲁氏菌可以引起人畜共患疾病布鲁氏菌病，简称布病。世界动物卫生组织将该病规定为强制报告的疫病，我国将其列为二类动物疫病。人类布鲁氏菌病在我国属于法定乙类传染病。布鲁氏菌的致病性与侵袭力、致敏原、内毒素和在巨噬细胞中的生存力有关。主要致病因子是内毒素。布鲁氏菌具有致敏性，该菌进入集体，除诱发机体产生各种类型抗体外，还可刺激机体产生明显过敏反应，过敏反应是布病的重要致病机制之一。一、临床表现人类布病一般潜伏期为13周，平均为2周。个别病例潜伏期可长达1年。目前多数病例发病缓慢，少数起病急骤，一般类似感冒。布病患者最常出现的症状是发热，典型的波浪式起伏发热。目前临床上多为

2、低热，间歇热等。同发热相伴的症状是多汗，一般在晚上增多，出现盗汗，汗质较黏。另一个常见的症状是关节肌肉痛，在急性期常呈游走性，主要在大关节，慢性期疼痛局限于大关节。其他症状和体征有乏力、精神不振、皮疹、肝脾淋巴肿大、睾丸肿大、关节肿大、皮下结节出现等。二、流行病学特征人类布菌病的主要传染源是羊、牛、猪等,羊是人类布病最危险的传染源，牛是人群布病散发的主要传染源。野生动物也可作为传染源，野生动物的布病感染是在自然疫源地内的野生动物之间相互传播，有的感染还和家畜有关。人对布鲁氏菌普遍易感，通过皮肤接触、消化道、呼吸道侵入机体。人感染途径与职业、生活习惯相关，有明显的职业性。实验室人员主要以呼吸道感

3、染为主。我国自1905年来，累计已有29个省市区报告过布病，多见于我国东北、西北和内蒙的牧区。三、防治原则布病的防治重点是控制和消灭病畜。采取检疫、免疫、捕杀病畜三结合的综合性防治措施，通过加强对畜牧产品的卫生监督控制布病的传染源,切断其传播途径；通过对易感人群和健康家畜接种疫苗预防布病的发生。急性患者采用抗生素治疗，慢性期患者可采用特异性疫苗脱敏治疗。四、生物学特征布鲁氏菌是革兰氏阴性球杆菌，柯氏染色呈红色，无鞭毛，无芽抱，不形成荚膜。布鲁氏菌的营养要求比较高，专性需氧，大多数菌在肉汤培养中呈均匀混浊生长，无菌膜，无沉淀形成。马铃薯琼脂培养基，3637。C生长良好，但生长缓慢。第一代分离培养

4、物需要57d,有的需要620d0强毒株生长速度比弱毒株慢。五、实验室检查(-)样品的采集、送检与保存1 .样品的采集(1病人:无菌采集病人、疑似病人静脉血35m1;脑脊液、关节液1m1o(2)病畜：从颈部静脉取血510m1.(3)乳汁：洗净家畜乳房，用酒精消毒后，挤出最初几滴乳汁，收集后面乳汁于无菌试管中。2 .送检与保存所采集的样品要以最快最直接的途径送往实验室。若样品能在采集后24小时内送抵实验室，则可放在加冰块的保温盒中运送。采集过程中要注意个人防护，运送的样品要用放渗材料密封包装。在24h内不能送到实验室时，可将样品冷冻，并维持低温状态运送。（二）分离鉴定1 .分离培养采用双相培养法。

5、等体积样品分别接种于2个双相培养瓶中，轻摇混匀，倾斜，使样品分布在琼脂斜面上J个放37。（：培养，一个放含5%CO2环境37。C培养,三天后观察结果。如斜面上有菌落生长，取菌落纯化后做下一步鉴定；如无菌生长，继续培养，每天观察一次，培养20d未分离出菌即可判为阴性。常规可根据菌落生长时间和形态、菌体形态和染色、血清凝集试验阳性确定布鲁氏菌。根据Tb噬菌体裂解、染料抑菌试验、H2S产生等试验，进行布鲁氏菌菌种、生物型鉴定。2 .噬菌体裂解试验两个琼脂平板上,各滴加1滴布鲁氏菌噬菌体。培养后,平皿出现噬菌圈，圈内无布鲁氏菌生长为噬菌体试验阳性。3 .染液抑菌试验一定浓度某些染液对不同种型布鲁氏菌表

6、现出的抑制作用和能力。可根据不同染液对布鲁氏菌抑制作用情况作为种型鉴定依据。4 .H2S产生试验不同种型布鲁氏菌在代谢过程中分解培养基中含硫的氨基酸，产生H2S、氨、脂肪酸等。H2S和滤纸条上醋酸铅发生反应，生成黑色铅的硫化物。根据H2S产生的多少，滤纸变黑的深浅区别可不同种型布鲁氏菌。（三）免疫学与血清学检验布鲁氏菌的免疫学和血清学检测方法有试管凝集试验（SAT）和平板凝集试验（PATX用于检查感染布鲁氏菌后产生的特异性抗体，是一种定量、敏感和特异性较高的实验方法。目前实验室主要用虎红平板凝集试验(RBPT),这是国内外常用的技术，方法简便，适用于大面积规模检疫筛选。(四)实验室环境与个人防护根据国家的相关规定，布鲁氏菌的初步分离可以在2级生物安全实验室内进行，并做好个人防护。涉及大量活菌的操作时应在3级生物安全实验室内进行。在2级生物安全实验室内进行布鲁氏菌检验最好设专室。