细胞增殖检查记录2.docx

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1、批号送检日期检测日期试验类型初试复试口重试重（复）试原因初试不合格,初试不成立，口稳定性检验1.第一次细胞传代1.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检善.设备：超净工作台倒置显微镜、是否处于完好、清洁状态是否在验证有效期内.是口否口是口否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口否口是口否口消毒剂检查口1%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年月日口5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年月日口1%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日口5%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日备注操作人：日期：复核人:日期:1.2操作前准备工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录物料确认按照工艺要

2、求准备物品：50d瓶、IOOm1瓶、IOm1瓶、橡胶塞、In1I吸管、IOm1吸管、无毛抹布、C级区洁净服及口罩、吸球、不锈钢盆。灭菌批号有效期至年月日灭菌批号有效期至年月日物料名称来源规格（m1/瓶）批号领入数（瓶）有效期至E-MEM培养基木室自配7.5%碳酸氢钠本室自配3.0%谷氨酰胺本室自配0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS待检新生牛血清对照新生牛血清细胞种子确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS株）口伸展呈成纤维状致密单层口光亮透明口无污染有污染细胞死亡操作人：日期：复核人:日期:13操作工作时间：年月日时分至时分工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录

3、液体配制生长液配制：配方：IOOm1E-MEM+1%（m1m1）（3.0%谷氨酰胺）+1%PS+2.6%（m1m1）（7.5%碳酸氢钠）+10%（m1m1）新生牛山清以配制100.Om1生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所需E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS、7.5%碳酸氢钠。用IOm1吸管抽取对照新生牛血清及待检新生牛血清加入对应体积的液体EfEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM：m13.0%谷氨酰胺：m1PS:m17.5%碳酸氢钠：m12、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液m1,加对照新生牛血清m1O3、待检新生牛血清细胞生长液的

4、制备：取上述培养液m1,加待检新生牛血清m1o消化液配制：以20m1体积装量的浓度为0.25%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（m1m1）（8.0%碳酸氢钠）。1计算：7.5%碳酸氢钠=2OmI2.0%=0.4m12.操作步骤：取装量为20m1的0.25%胰蛋白酶瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞消化、传代分种与细胞计数1弃旧生长液，每50m1瓶中加入胰蛋白酶消化液46m1;2 .待细胞面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入8m1生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞从瓶壁上脱落悬入生长液中4 .细胞计数5 .使用IOn1I吸管按1：4分种率将细胞悬液分种于生长液

5、瓶中，振荡摇匀后加入50m1瓶中;是口否口是口否口是口否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞：用含有待检血清的生长液悬浮的细胞：含待检新生牛血清分种个50m1瓶，含对照新生牛血清分种个50m1瓶培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37C培养。是口否口细胞使用情况细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS株）操作人：日期：复核人：日期：.1.4待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者年月日口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落年月日口贴壁

6、良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落年月日口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状口未伸展的球状口光亮透明口浑浊口致密单层口薄单层口未成单层口可见较多分裂相口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落2.第二次细胞传代2.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查:养箱、超净工作台、倒置显微镜、是否处于完好、清洁状态是否在验证有效期内是口否口是口否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口否口是口否口消毒剂检查口1%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年

7、月日口5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年月日口1%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日口5%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日备注操作人：日期：复核人:日期:2.2操作前准备工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录物料确认按照工艺要求准备物品：25cr2细胞瓶、IOOn1I瓶、IOm1瓶、橡胶塞、InI1灭菌批号有效期至年月日吸管、IOmI吸管、分装管道、无毛抹布、吸球、不锈钢盆、桶。C级区洁净服及口罩、灭菌批号有效期至年月日物料名称来源规格（m1/瓶）批号领入数量（瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配7.5%碳酸氢钠本室自配3.0%谷氨酰胺本室自配0.25%胰蛋白酶本室自配10000单位PS本室

8、自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞种子确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS株）口伸展呈成纤维状致密单层口光亮透明口无污染口有污染口细胞死亡备注操作人：日期：复核人:日期:2.3操作工作时间：年月日时分至时分工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录液体配制生长液配制：配方：IOOm1E-MEM+1%（m1m1）（3.0%谷氨酰胺）+1%PS+2.6%（m1m1）（7.5%碳酸氢钠）+10%（m1m1）新生牛血清以配制100.Om1生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所需E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS、7.5%碳酸氢钠。用IOm1吸管抽取对照新生牛血清及待

9、检新生牛血清加入对应体积的液体EfEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM：m13.0%谷氨酰胺：m1PS:m17.5%碳酸氢钠：m12、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液m1,加对照新生牛血清mb3、待检新生牛血清细胞生长液的制备：取上述培养液In1加待检新生牛血清m1o消化液配制：以20m1体积装量的浓度为0.25%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（m1/m1）（7.5%碳酸氢钠）。1计算：7.5%碳酸氢钠=2Om1X2.0%=0.4m12.操作步骤：取装量为20m1的0.25%胰蛋白酶瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞消化、传代1弃旧生长液，每25

10、02瓶中加入胰蛋白酶消化液46m12.待细胞面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消是口否口是口否口分种与细胞计数化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入8m1生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞从瓶壁上脱落悬入生长液中4 .细胞计数5 .使用IOn1I吸管按1：4分种率将细胞悬液分种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入31瓶中；是口否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞：一用含有待检血清的生长液悬浮的细胞：含待检新生牛血清分种个25c12瓶，含对照新生牛血清分种个25c一瓶培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37培养。是口否口细胞使用情况细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS株

11、）备注操作人：日期：复核人：日期：2.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需在房间门上悬挂“待处理”标志牌，关闭层流罩，日光灯。悬挂“待处理”标志牌，关闭层流罩，日光灯。合格口不合格口按生产区清场、清洁、消毒管理标准操作规程对操作区域进行清洁、消毒。将不锈钢盆、桶、250m1瓶、500m1瓶、橡胶塞、吸管、送到洗刷间清洗。合格口不合格口按要求悬挂状态标识。正确悬挂状态标识牌标识。合格口不合格口废弃物装袋放固定位置送出。废弃物装袋放固定位置送出。合格口不合格口操作人：日期：复核人：日期检查人：日期2.5待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者年月日口贴壁良好口伸

12、展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落口未成单层年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口未成单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落年月H口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落口未成单层3.第三次细胞传代3.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况生产环境检查操作间名称：细胞制备间环境温度1526相

13、对湿度3070%是口否口是口否口设施、设备检查培养箱、洁净工作台、倒置显微镜、是否处于完好、清洁状态是否在验证有效期内是口否口是口否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口否口是口否口消毒剂检查口1%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年月日.口5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年月日.口1%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日.口5%来苏儿：批号、效期有效期至：年月日,备注操作人：日期：复核人:日期:3.2 操作前准备工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录物料确认按照工艺要求准备物品：50m1瓶、IOOm1瓶、IOm1瓶、橡胶塞、ImI吸管、IomI吸管、无毛抹布、吸球、不锈钢盆、桶、C级区洁净服及口罩、物品在灭菌有效期内：