KJWI-QA-26霉菌和酵母菌计数.docx

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1、文件修改记录版本修订次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号：（仅适用于控制文件）（仅盖有红色印章的文件才有效）1o目的1.1规定食品中毒菌和醉母菌计数的方法。2.0适用范围2.1适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数。3.O职责微生物检验员负责按作业指导书进行检验。4.0术语（无）5.0工作流程图见附录A中A.16.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1冰箱：25C。6.1.2恒温培养箱：281oCo6.1.3显微镜：10-100o6.1.4电子天平:感量41go6.1.5无菌锥形

2、瓶:容量500m1、250m106.1.6无菌广口瓶：500m1o6.1.7无菌吸管：1m1（0.01m1刻度）、10m1（具0.1m1刻度）。6.1.8无菌平皿：直径90mmo6.1.9无菌试管：10mmX75mm。6. 1.10无菌灭菌桶。6.2培养基和试剂6. 2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.2。7. 2.2孟加拉红培养基：见附录A中A.3。8. 3操作步骤9. 3.1样品的稀释10. 3.1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225m1灭菌蒸储水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225m1无菌蒸储水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min,制成1:

3、10的样品匀液。11. 3.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25m1样品至盛有225In1无菌蒸饰水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。12. 3.1.3取1m11:10稀释液注入含有9m1无菌水的试管中，另换一支1m1无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。13. 3.1.4按6.3.13操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1m1无菌吸管。14. 3.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1m1样品匀液于2个无菌平皿内。同时分

4、别取1In1样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。15. 3.1.6及时将15m120m1冷却至46C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基（可放置于46C1C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.3.2培养待琼脂凝固后，将平板倒置，28C1C培养5d,观察并记录。6.3.3菌落计数肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（co1onyformingunits,CFU）表示。选取菌落数在10CFU150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。6.4结果与报告

5、6.4.1计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。6.4.1.1若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.4.1.2若所有平板上菌落数均小于IOCFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.4.13若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。6.4.2报告6.4.2.1菌落数在IOO以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。6. 4.2.2菌落数大于或等于100时，前3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字

6、，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。6.4.2.3称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/m1为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。7. 0相关文件无8. 0质量记录表单8.1 KJWIF-QA-35原辅料及食品接触面微生物检验报告附录A（规范性附录）培养基和试剂A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂A.1.1成分马铃薯（去皮切块）300g葡萄糖20.0g琼脂20.0g氯霉素0.1g蒸储水IOoOm1A.1.2制法将马铃薯去皮切块，加IOoOm1蒸储水，煮沸10min-20min0用纱布过滤，补加蒸t留水至1000m1o

7、加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121C灭菌20min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中A. 2孟加拉红培养基A.2.1成分蛋白陈5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氢钾1Og硫酸镁（无水）05g琼脂20.0g孟加拉红0.033g氯霉素0.1g蒸馈水IOOOm1A.2.2制法上述各成分加入蒸镭水中，加热溶化，补足蒸馄水至IOOOm1,分装后，121C灭菌20min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。附录B（资料性附录）霉菌直接镜检计数法常用的为郝氏霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头。B.1设备和材料8. 1.1折光仪。8. 1.2显微镜。8. 1.3郝氏计测玻片：具有标准

8、计测室的特制玻片。8. 1.4盖玻片。8. 1.5测微器：具标准刻度的玻片。8. 2操作步骤8 .2.1检样的制备：取定量检样,加蒸偏水稀释至折光指数为1344713460（即浓度为9 .9%-8.8%）,备用。8. 2.2显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率90125倍调节标准视野，使其直径为1.382nun。8. 2.3涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。8. 2.4观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察50个视野，同一检样应由两人进行观察。B. 2.5结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（1.382mm）的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测微器的一格）时即为阳性（+）,否则为阴性（-），按100个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。附录C霉菌和酵母计数的检验程序