生化分析基本名词.docx

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1、一基本名词1 .单试剂:只有R1试剂,如:Ca, Mg, ALB, TP,当样本加入到试剂中时,即刻开始反应。2 .双试剂:有R1,R2配套两种试剂,样本首先加入到试剂R1中参与反应,育温后再加入试剂R2,进一步反应来达到检测的目的。通常R1与样本反应,达到去除干扰或为加入R2后的进一步反应做准备的目的。3加样模式:不同的仪器有不同的加样方式:3.1 双试剂加样模式:R1加入后,加入样本(S),开始为下一步加入R2后的反应作准备,再经一定的时间后,加入R2,开始进行检测所需要的反应。3.2 单试剂加样模式:先加入R1,再加入R2,经过一定的时间再加入样本,再进行检测反应。4.单试剂与双试剂的界

2、限:在某些双试剂,由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同,有的双试剂可以事先混成单试齐IJ,但有的双试剂只能用双试剂通道来做。如:4.1 R1用来去干扰的目的:R1试剂用来清除血清中的干扰物,防止R2与血清中的干扰物反应。如化学氧化法的TBIL,DBIL, CR (酶),LDL-C 等。4.2 单试剂不稳定:R1,R2中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及吸光度变化率的改变等。(CHE,GGT)4 . 3仪器自身特点:同时试剂的应用也要考虑到检测仪器的特点,因为有的仪器(如半自动,手工)它没有双试剂的加样模式,那它只能用单试剂来做,一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂

3、加样来做,但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。5 .标准品:实际上是一个或几个已知浓度的样本,它在检测中作为一个或几个参照物,使以后的所有的检测都与之比校,以此来得到其它样本的浓度。6 .标准品的定义:6. 1国际标准品由WHO或相应组织标定的,用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的定值材料。6. 2国际生物学活性标准品根据生物学反应由WHO或相应组织标定的国际活性单位的材料。6. 3参考标准血清国家标准化组织根据国际标准化生产的法定材料。标准品明确赋值,通过校正后,得到较为规范的标准曲线,以此得到代表检测样本浓度与该样本吸光度之间的函数关系。7标准品稳定性的重要性

4、:标准品作为其它样本检测的标准,必须保持它的准确性和稳定性,一旦标准出现问题,后果很严重。在保存一定时间后,如果标准品的实际浓度降低了,那么定标(校准)后检测样本时该测值就会偏高,反之,如果标准品实际浓度变高了,那么测定值就会偏低。所以标准品在运输,储存过程中一定要慎重,以免其变质。8质控品:质控血清是已有靶值的血清,并且对它的测定有一定允许的偏差,在每次的常规检验中加入一份或数份,通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内,就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果,提示该检验不合格,应寻找原因,纠正后,重检待测标本。因此质控血清

5、在质控工作中起重要作用。同样质控品必须要与试剂的体系一致,如果两种方法学或者两个体系的试剂之间的质控就不一定能够做到相互符合。所以试剂与质控必须一致使用。9实时反应曲线:在自动生化分析仪一定周期的监测下,通过时间与相对应的吸光度值之间的轨迹,描绘得到的曲线。通过实时反应曲线真实地反应了试剂与样本反应的程度。10标准曲线:在标准品定标的反应中,标准曲线就是在线性范围内,标准品吸光度与浓度成比例的一条线,多点定标常为曲线,一点定标为一直线。它们作为以后样本检测的一种规范。11标准曲线与实时反应曲线的关系:标准曲线是针对标准品浓度与吸光度之间的关系而言的,表示该反应的函数关系式,所有的样本反应都要依

6、据这个关系。而实时反应曲线是对每一个样本来说的,只表示该样本反应的程度,只是吸光度与时间的一种关系。一般对一个新的试剂来说,总是先做标准品定标(校准),再进行相应的样本检测。11多点定标和一点定标:通过多个浓度有一定梯度的标准液来定标(校准),规范出标准曲线的一定的趋势,以此来得到浓度与吸光度的函数。多点定标大多用于非线性校准,得到的标准曲线一般为二次函数的抛物线类型。只用一个标准品来定标,得到的函数为Y (浓度)=AX(吸光度)+B,是一条简单的直线。13测试量(Test):通常在生化分析仪上对病人检测所用的试剂的用量很小,一般总共为240-3503左右,所以根据一盒试剂来说(大约有150-

7、300mL),就可以换算成多少的测试量。同样可以来说明它有每mL可以做多少的人份,一盒可以做多少的Test,或者多少人份。14灵敏度1)为试剂检出被检物质的最低量的能力;2)临床应用的灵敏度用疾病患者试验阳性的百分率表示15特异性指试剂正确检定不存在的被检物质的能力(无假阳性),以无病者试验阴性的百分率表示。16特异性与灵敏度的评价方法:对试剂进行灵敏度与特异性评价,首先需要收集有关的病人血清,然后用公认的检测该项标志物最可靠的试剂进行测定,以确定其为阳性或阴性。通过对照得到试剂灵敏度与特异性的指标。公认方法测定合计+受检试剂结果+abbCdd合计a+cb+db+d表中a为真阳性,b为假阳性,

8、c为假阴性,d为真阴性。被评价试剂的各项性能指标按以下分式计算:灵敏度()=a/(a+c)x 100%特异性(产b/(b+d)x 100%符合率(%)=(a+d)/(a+b+c+d) xlOO%一般认为灵敏度或特异性90%为良好。符合率是综合灵敏度和特异性的指标17准确度:是指测定结果与真值(或靶值)接近的程度。准确度不能以数字表示,往往用不准确度来衡量。测定结果与靶值的偏离程度称为偏差,它表示该项检验的不准确度。绝对偏差二检验的均值-真值(或靶值)相对偏差二绝对偏差真值+ (或靶值)X100%18精密度:是指对同一样本重复测定时,每次测定结果与平均值的接近程度,即重复测定值之间的符合程度。C

9、V% = SD/X平均19稳定性试剂在规定条件下能储存的时间,一般采用破坏性试验即将试剂存放于37c保存,定期测定其灵敏度,特异性和精密度等指标,直到其质量指标开始下降为止,通常认为37c每稳定一天相当于410保存一个半月。20开盖稳定性特例:20 . 1 C02:试剂在开盖情况下,空气中CO2会进入试剂中与试剂发生反应,与试剂中NADH反应,便使空白吸光度达不到特定的要求,引起检测能力的降低。使得测定值偏低。21 .2ALP, CR (苦),Mg, HBDH, BUN:开盖后试剂的PH会因为空气中CO2的进入,发生改变,也会引起测定值的偏差。21 .线性范围:试剂在检测样本时,测定值落在此范

10、围内时测值在一定的(可以允许的误码差范围内),超过该区问时,则准确度将无法保证,测定值发生较大的偏差。所以线性范围也是试剂优良与否的评价之一。22 .安全性:指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。23 .经济性:试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。24 .干扰:血清中某些成份与要求被测定的物质结构相仿,化学性质相似,或者同样可以与试剂成份发生反应,使检测过程中产生意外的变化,产生误差。如脂血干扰,溶血干扰,脂浊干扰,黄疸干扰。此类为血清对试剂的干扰;同时也会发生不同的试剂之间的干扰。25 . 1 TBA与胆酸钠:在一些常规的试剂中,如TG, TCH, GSP

11、中其成份通常含有胆酸钠,如果反应杯没有清洗干净,残留的胆酸钠就会与TBA试剂反生反应,与血清中的TBA相比,使检测的值发生异常的偏高。24. 2 TP 与铜:在TP试剂中有铜离子的存在,同样要是没有清洗干净反应杯的话,残留的铜离子就会与CU试剂反应,也使测定的值发生偏高。24. 3 ALP 与锌:在ALP试剂中有锌离子的存在,同样要是反应杯没有清洗干净,残留的锌离子就会与锌试剂反应,也使测定的值发生偏高。24. 4 TBIL的强氧化与一些酶试剂:化学氧化法的胆红素,其中有氧化力较强的氧化剂,在通道中如果清冼不完,就会有残余留在反应杯上,如果一些酶试剂在此杯进行下一次检测,残余的氧化剂就会对这些

12、项目发生干扰。如TG,TCH, CR, UA 等。24.5介质效应25交叉污染:某些试剂成份中的酸碱度不同,氧化还原能力各异,相互之间会有反应,而且在多数情况下全自动生化分析仪通过自动蒸储水一次冲洗不能解决反应杯内的试剂残余,因此会对下一次检测造成污染,使用全自动生化仪随机组合检测项目时,某些项目不能随心所欲、必须注意位置的特别设置。原则是将具相同反应原理放在一起,相同酸碱度反应放在一起;试剂内含有被测成份的和该项H相隔两个项目位置以上。26参数设置:根据试剂本身特定的性质来监测,控制反应,最大限度的得到检测结果的准确性。27参考值:以前叫正常值确良通过对该项目正常人群检测的临床数据来制定的,

13、规定出正常人该项目值的大致范围。由于许多因素(人种,地区,实验室仪器,方法学,各生产厂家的试剂等)都会影响到正常值的限定。所以建议各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值范围。28速率法:在检测反应中,反应检测到的吸光度随时间的变化呈现出有固定梯度的升高或降低。对低浓度的样本,它的吸光度随时间变化的慢,(速率低),而高浓度样本,它的吸光度随时间的快(速率高)。29终点法:试剂与样本反应之前的吸光度在某一定的水平,开始反应后,在主波长下出现一个最大的吸光度,得到一个较明显的吸光度的落差,所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样本的浓度。终点法中的反应时间是指开始反应后,试剂与反应物反应到达一定

14、的稳定点,试剂与反应物不再反应,吸光度不再随时间的变化而发生改变,既到达了反应平衡。其间所要的时间就是反应时间。30试剂空白:严格的试剂空白与正常测定的唯一区别就是其样本是水。而奥林巴斯生化仪由于是先加R1再加样本然后再加R2,因此就能够把加了样本后的溶液本底也消除掉,这就是两点终点法,有时把这种含有样本但不含R2的溶液本底也叫试剂空白,试剂空白的意义就在于消除试剂本底的干扰。试剂空白的吸光度就叫空白吸光度31水空白:(杯空白):以足量的纯水灌注比色杯而测得的OD32空白速率:用速率法的试剂因为某些成份自己会发生较缓慢的变化,所以用水作样本时也会发生吸光度的变化,所以用水作样本得到的试剂吸光度

15、的变化率即空白速率.33空白值:当水作为样本得到空白速率反应在浓度上就是空白值。34 K因子:酶活性测定校准问题中有的主张不进行校准而采用固定K值,有的以为应该进行校准.常用K值有以下几种:34.1. 理论K值:根据理论摩尔消光系数(Q来计算,如NADH为6.22x103。34.2. 实测K值:由于仪器波长的精密及径宽度不同,而应根据实测g值来设定K值343厂家给的K值:厂家生产试剂盒说明书上提供的K值(有的厂家提供6.3x103)34.4. 准K值:通过校准物直接校准得到的K值35校准模式:用它来规范吸光度与浓度之间的函数关系式,比如线性:一点校准(Y=KX+b),二点(Y=aX+b,通过水来计算得到b,通过标准品来得到a.)。非线性:多点校准(Logit-log(3P),Logit-log(4P),spline)等,用二次函数或指数来描绘校准的曲线与公式。36线性范围与试剂样本比:对一些需要通过校准的试剂而言,如果改变试剂与样本的比例,线性范围也会相应的发

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