游离T3FT3标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-11游离T3 FT3版序：ABCD页码：第1页，共3页用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆的游离三碘甲腺原氨酸（fT3）含量。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys、2010免疫测定分析仪。概述：三碘甲腺原氨酸（T3）是血清中的甲状腺激素之一，起调节代谢作用。测定该激素的含量对鉴别诊断甲状腺功能是否正常、亢进或低下有重要意义。绝大多数的T3与其转运蛋白质（TBG、前白蛋白、白蛋白）结合，fT3是T3的生理活性形式。fT3测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响。因此不需另加测定结合参数（T-uptake, TBG） 0连续

2、的测定步骤和采用标记抗体可降低来自血清某些结合特性改变的影响，如见于用抗原做标记物的测定方法。有许多方法可用于测定fT3的水平。通过平衡透析或超滤法直接测定fT3和fT4主要作为参考方法，用于标化那些作常规诊断手段的免疫学方法。Elecsys fT3采用钉标记的抗T3抗体。原理：采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：30l （Elecsys2010）或20l （Elecsysl010）标本和钉标记的抗T3抗体混匀。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T3。后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点，形成抗体-半抗原复合物。形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒

3、上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂:M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，12ml。粒子浓度0.72mgml,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。R1：钉标记的羊抗T3多克隆抗体（灰盖），1瓶，14ml。浓度75ngml,磷酸缓冲液0. lmoll, pH7.40 含防腐剂。R2：生物素化的T3（黑盖），1瓶，14mlo浓度5ngml,磷酸缓冲液0. l

4、moll, pH7. 4。含防腐剂。储存和稳定性：存放在2 8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-11游离T3 FT3版序：ABCD页码：第2页，共3页开封后，2-8度12周；放在E170上，5周；放在Elecsys2010上，8周；(使用后放回2 8度；如置20 25度，约20小时)。标本米集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂、钠、钱；EDTA-K3；柠檬酸钠；氟化钠/草酸钾抗凝均可。标本在2一8度可稳定7天，-20度至少可稳定1个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。标本

5、、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。检测步骤：提供的材料：货号：11731386, 200人份的Elecsys fT3试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1钉标记的抗T3多克隆抗体 R2生物素化的T3需要的材料(未提供)： Elecsys fT3定标液(fT3 CalSet)货号 11731521 Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)货号 11731416 Elecsys 2010分析仪: Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号 11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCel

6、l)货号 11662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号 11930346 Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159 Elecsys 2010反应杯(Assay Cup)货号 11706802 Elecsys 2010吸样头(Assay Tip)货号 11706799 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 11298500方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入

7、15位数字。Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-11游离T3 FT3版序：ABCD页码：第3页，共3页定标：每批fT3试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用Elecsys fT3定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂） 4天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：Elecsys通用质控品1和2以及其它合适的质控品。各浓度

8、区域的质控至少每24工作时、每个试剂盒或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：对每一个标本，仪器会自动计算fT3含量，单位是pmoll, pg/ml或ng/dl。换算方法是pmol/1 X0. 651=pgml （0. 0451=ngdl） ; pg/ml 1. 536=pmoll干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素37gdl）、溶血（血红蛋白（2gdl）、脂血脂质150（gdl）生物素20ngml等干扰。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。24种常用药物

9、经试验对本测定无干扰。但治疗浓度的乙酰水杨酸和吠塞米可升高fT3水平。本试验受甲状腺激素自身抗体的干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys fT3测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。检测范围：0. 40050. 0（01/1或0. 260-32. 55pgml稀释：标本不可以稀释，因为血中的T3是以游离状态以及结合状态两种形式存在,并处在平衡状态中。结合蛋白质浓度的变化可改变这种平衡。正常参考值：2. 8-7. lpmol/1 或 1. 8-4. 6pgml （范围:第2. 5百分位一第97. 5百分位,n=962） o如有必要，各实验室应自己测定一个正常值范围。