禽流感病毒H5N1实验活动风险评估报告.docx

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1、禽流感病毒H5N1实验活动风险评估报告一、生物因子(-)一般特性禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型禽流感病毒(AvianInfluenza Virus,AIV)引起禽的一种从呼吸系统到严重全身性败血症等多种症状的禽类病毒性传染病，鸡、火鸡、鸭和鹤鹑等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。目前美洲、非洲、欧洲、亚洲、澳大利亚等世界上许多国家和地区都曾暴发过本病。禽流感病毒呈世界性分布，绝大多数禽流感病毒呈隐性感染，不表现任何临床症状；只有少数禽流感病毒具有迅速传播和高致死性的特征，引发高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)

2、o 高致病性禽流感通常是由H5和117亚型引起的，是严重危害养禽业的重大传染病之一。2004年至今，我国部分地区已经出现多起H5N1高致病性禽流感疫情,发生人感染禽流感事件，引起18人感染6人死亡，这是人类感染H5N1亚型HPAI病毒的首次报导，并由此引起了全世界的广泛关注。而20052006年间发生的包括我国在内的亚洲国家的IIPAI引起的人间病例多达47起，致33人死亡。因此，HPAI成为继SARS以后另外一个严重威胁人类健康的新发传染病，属于乙类传染病，但按甲类管理。（二）来源禽流感的传染源可来自感染或发病的家禽、野生鸟类、迁徙的水禽及哺乳动物。家禽最初的感染来源有以下三种。来自于家禽，

3、从鸡群和相邻的鸭群可分离出同一血清亚型的病毒，火鸡群和相邻的鸡群也是如此，鹤鹑、珍珠鸡和雉鸡都有类似的报导。有很多的证据表明禽流感病毒可以从一个养殖场传播到相邻养殖场的同种或异种禽群。来自野生鸟类的传播，特别是迁徙性的水禽，被认为是家禽流感暴发最有可能的感染来源。家禽极有可能接触这些鸟类及排泄物，有研究证明从家禽中分离出的禽流感病毒血清亚型与这些鸟类感和人流感病毒与人呼吸道上皮细胞结合的受体不同，禽流感病毒要突破种间屏障传播给人的概率尚小。但流感病毒非常容易发生变异，一旦禽流感和人流感病毒发生重配，禽流感病毒就获得与人呼吸道上皮细胞结合的能力，则可导致其在人间的传播能力大大加强。应引起注意的是

4、，禽流感病毒有可能由人传染给人。越南1女孩感染禽流感死亡，其母亲在护理过程中，与其接触密切，随后母亲也感染禽流感死亡。（四）传播途径禽流感一年四季均可发生，但以冬季、春季最为严重。病毒的传播方式主要是水平传播，感染途径主要是通过呼吸道和消化道。病毒通过病禽的分泌物、排泄物和尸体等污染饲料、饮水和其他物体，通过直接接触和间接接触发生感染。感染禽能从粪便中排出大量病毒，污染一切物品，如饲料、饮水、设备、笼具、蛋筐、蛋盘、输精工具、动物、飞沫、衣服、运输车辆等。这些均可成为病原的机械性传播媒介。人员的流动与消毒不彻底，也可导致病毒的传播。病毒在畜禽之间的传播，特别是在不同群落、不同物种之间的传播，形

5、成了HPAI的扩散和流行。病禽类的分泌物、排泄物、羽毛及其污染的水等含有大量病毒,人们通过与其密切接触可感染，病毒可通过黏膜、破损皮肤、消化道、呼吸道进入体内。这些含有感染性的污染物受外力的作用可形成病毒气溶胶。形成的病毒气溶胶在空气中扩散（一定的时间和距离）、沉积在各种物体表面上；当人体吸入病毒气溶胶后可能导致感染发病，病毒气溶胶沉积在人的黏膜、破损皮肤或食物上也可引起感染。此外,呼吸道分泌物受到呼气、咳嗽、叫唤等作用进入空气而形成微小的飞沫及其“飞沫核”。飞沫和“飞沫核”也有很强的感染性，即气溶胶感染。所以，禽流感的传播媒介和侵入途径是多种多样的，在操作中应采取综合防护措施。（五）易感性对

6、人类而言，一般认为任何年龄均具有易感性，但12岁以下儿童的发病率较高，病情较重。与不明原因病死家禽或感染、疑似感染禽流感的密切接触人员为高危人群。发病前1周内曾到过禽流感暴发的疫点，或与被感染的禽类及其分泌物、排泄物等有密切接触者，或从事禽流感病毒实验室工作人员为易感人群。少数报导，与禽流感患者有密切接触的人可感染发病。（六）潜伏期潜伏期一般为l3d,通常在7d以内，最长的为21d。（七）剂量一效应关系感染剂量尚未见报道，但根据流行病学资料和病原特性分析，最小感染量不会太大，禽类易感染，但由于存在种间屏障，人类尚不易感染高致病性禽流感病毒，禽流感病毒在人间的传播是“温和”的。在进行活病毒的操作

7、时，如咽拭子、肺组织、血液标本的处理和病毒的分离实验，检测所用的标本为疑似高致病性禽流感病人的咽拭子、肺组织和血液标本。故这些标本当中有可能含活病毒，但是浓度不同。在进行高致病性禽流感病毒效价测定实验时，利用多次扩增后的病毒进行效价测定，通常病毒滴度大约可达10lOTCID/niL。保存病毒时，冻存管中的病毒悬液一般为0.5hnL管，滴度与增殖后的病毒相同。对于高致病性禽流感病毒RNA提取试验，实验用的是临床上的咽拭子和血液标本，由于临床疑似病人标本原则上和上述各种实验过程所用到的病毒原液相比，病毒浓度要小得多。因此，在提取之前有一定传染性，但是灭活后无感染性。本实验室涉及大量病毒的培养和浓缩

8、，如处理病毒分离阳性物,病毒分离阳性物中病毒核酸提取，用于病毒全序列的测定，高致病性禽流感病毒中和抗体测定和高致病性禽流感病毒药物敏感性试验等都涉及大量病毒。通常，细胞培养阳性分离物的病毒滴度大约可达10,-106TCID5omLo（八）致病性高致病性禽流感病毒的致病性强，除对禽类可致死以外，对人致死率也比较高，可经多种途径传播感染。临床表现为急性发病，早期表现类似普通型流感。主要为发热，体温大多持续在39C以上，热程17d, 一般为34d,可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适。部分患者可有恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症状。重症患者病情发展迅速，可出现肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺

9、出血、胸腔积液、全血细胞减少、肾功能衰竭、败血症、休克及Reye综合征等多种并发症。重者肺部实变，胸部X线检查可显示单侧或双侧肺炎，少数可伴有胸腔积液等。人禽流感的预后与感染的病毒亚.型有关，感染H9N2、H7N7者，大多预后良好；而感染H5N1者预后较差，据目前医学资料报告，病死率约为30%。影响预后的因素除与感染的病毒亚型有关外，还与患者年龄、是否有基础性疾病、治疗是否及时，以及是否发生并发症等有关。尚无特异性治疗手段，发病前一天开始排毒，持续时间较长，免疫抑制者排毒长达一个多月。一旦暴发流行，就难以控制，后果十分严重。（九）变异性禽流感病毒基因组由8条独立的单链负股RNA组成，PB2、P

10、B1、PA、HA、NP、NA、M和NS。其中HA和NA最容易发生变异，在禽流感病毒的分子进化中起着关键作用。禽流感病毒和其他流感病毒一样，发生变异的途径包括抗原漂移和抗原转化。1 .抗原漂移HA能否裂解为HA1和HA2,这关系到该病毒粒子致病力的强弱，而HA对蛋白酶裂解的敏感性直接影响到病毒的毒力。在HA1和HA2连接处的肽链序列一般是R-X-R/K-Ro R-X-X-R是目前高致病性禽流感病毒所能识别的最小序列。和非致病性的病毒相比，几乎所有的A型流感病毒在HA1和HA2的连接处都有插入的氨基酸序列或在22位上缺少糖基化。这些变异使得HA的裂解更容易，同时也加强了病毒的毒力。抗原漂移很容易受

11、到环境压力的选择作用的影响。近年来，各种抗生素的使用，使得免疫系统对病毒的选择压力增大，导致病毒的变异率上升。抗原漂移是流感全部基因变化的积蓄。2 .抗原转化 禽流感病毒的基因组中含有8个片段，它比其他单链的病毒更易发生基因重组，从而产生上百种的病毒。另外，如果一个宿主同时受到两种或更多种的病毒交叉感染，在病毒繁殖复制期间，不同的病毒之间在包装前可能发生基因重组。重组后的病毒的致病力、传染性等特征会发生明显变异，就会同时具有感染不同宿主的可能。(十)稳定性禽流感病毒对热比较敏感，56加热30min或煮沸(100 ) 2min可灭活。病毒在粪便中可存活1周，在水中可存活1个月，在pH 750mL

12、L乙醇5min ImL/L碘酊5minImL/L盐酸3min和ImL/L甲醛30mm,均可灭活禽流感病毒。只进行物体表面消毒时，应按照先上后下，先左后右的方法，依次进行喷雾消毒。喷雾消毒可用0.2%0.5%过氧乙酸溶液或有效氯为10005000mgL的含氯消毒剂溶液。地面消毒先由外向内喷雾一次，喷药量为200300iLi2,待室内消毒完毕后，再由内向外重复喷雾一次。以上消毒处理的作用时间应不少于60min对室内空气进行消毒，可采用0. 2%0. 5%的过氧乙酸或3%过氧化氢，按20mLm3的量，使用气溶胶喷雾的方法消毒lh,消毒结束后进行通风换气。（十一）预防和治疗目前的季节性流感疫苗不能预防

13、高致病性禽流感病毒感染。需采取早发现、早报告、早隔离、早治疗，以及控制管理传染源为主的综合性防治措施。高致病性禽流感病毒的早期快速诊断主要集中在病毒的核酸检测。一旦出现或怀疑出现实验室感染时，应采集病人呼吸道分泌物以提取核酸做RT-PCR检测或实时荧光定量PCR检测，并对产物测序验证。另外，也可采集病人的双份血清进行微量中和实验，作为确诊的依据。在抗流感病毒的药物中，神经氨酸酶抑制剂如扎那米韦和达菲在体外对高致病性禽流感病毒有一定的治疗和预防效果。在感染的控制方面首先对疑似和确诊患者进行隔离治疗。要采用对症治疗，可应用解热药、缓解鼻黏膜充血药、止咳祛痰药等。儿童忌用阿司匹林或含阿司匹林，以及其

14、他水杨酸制剂的药物，避免引起儿童Reye综合征。当前，国际上推荐预防和早期治疗禽流感病毒的药物为神经氨酸酶抑制剂，如达菲。应用抗生素治疗可以减轻支原体和细菌性并发感染。应在发病48h内用抗流感病毒药物。对于神经氨酸酶抑制剂奥司他韦（Osel-tamivir,达菲），成人剂量为每日150mg,儿童剂量为每日3mgkg,分2次口服，疗程5d。中医药使用要及早，以清热、解毒、化湿、扶正祛邪。同时，加强支持治疗和预防并发症，注意休息、多饮水、增加营养，给易于消化的饮食。抗菌药物应在明确或有充分证据提示继发细菌感染时使用。重症或发生肺炎的患者应入院治疗，对出现呼吸功能障碍者给予吸氧及其他呼吸支持，对其他并发症患者应积极采取相应措施。（十二）事故分析本实验室未发生高致病性禽流感病毒H5N1感染事件。其他实验室发生的实验室感染事件报导如下。1987年，澳大利亚动物健康实验室的一名实验室人员进行新城疫病毒溶液浓缩实验。该实验人员没有按照标准操作进行，忘记检查用于浓缩