当归腹痛宁滴丸质量标准提高.docx

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1、当归腹痛宁滴丸质量标准提高朱琳刘东升朱旭江苏蕊姚世霞贺军权杨平荣20150401 20150402当归药材20150403阴性对照A.原标准的薄层色谱图BB.展开剂极性与点样量修改后的薄层色谱图图1薄层色谱图【摘要】目的：提高当归腹痛宁滴丸的质量标准。方法：修改原有当归药材的薄层鉴别方法;采用气相色谱法建立二氯甲烷溶剂残留的检查项;采用高效液相色谱法建立当归腹痛宁滴丸中主成分藁本内酯的含量测定项。结果：修改后的薄层色谱分离良好，斑点清晰；气相色谱法检测当归腹痛宁滴丸中二氯甲烷的最低检出限为3. 15 ugniLT；藁本内酯在0.10642.1290 ug范围内有良好的线性关系，相关系数在0.9

2、999以上，加样回收率n=9)为98 . 096(RSD=2.6%) o结论：通过以上实验所建立的方法简便可靠，重复性好，适用于当归腹痛宁滴丸的质量控制。Key当归腹痛宁滴丸；当归；质量标准;藁本内酯；二氯甲烷溶剂残留R284. 1 【文献标志码】A 1007-8517 (2020) 20-0032-07Improvement of Quality Standard of Danggui Futongning Droplet PillsZHU Linl, 2 LIU Dongshengl, 2 ZHU Xujiangl, 2 SU Ruil, 2 YAOShixial, 2 HE Junqua

3、nl, 2 YANG Pingrongl, 21 . Gansu Institute for Drug Control, Lanzhou 730070, China；2 .Gansu Inspection and testing technical engineering laboratory forChinese herbal and Tibetan medicine, Lanzhou 730070, ChinaAbstract： Objective To improve the quality standard of DangguiFutongning Droplet Pills. Met

4、hods The TLC (thin layer chromatography)identification method of Angelica sinensis was improved, thedetection items of residual dichloromethane solvent were establishedby gas chromatography, and the content determination method ofligustilide was established by liquid chromatography. Results The TLCo

5、f Angelica sinensis was well separated and the spots were clear； Theminimum detection limit of dichloromethane in Danggui Futongningdroplet pills by gas chromatography is 3. 15 u g e mL-1； Thecalibration curves of ligustilide were in a good linearity,R0. 999and the average recovery rate was 98. 0% (

6、RSD=2. 6%) . Conclusion Themethod is simple, reliable and reproducible- It is suitable for thequality control of Danggui FuTongning Droplet Pills.Keywords： Danggui Futongning Droplet Pills； Angelica； QualityStandard； Ligustilide； Residue of Dichloromethane Solvent当归腹痛宁滴丸具有解痉止痛的功效，主要用于妇女痛经、产后宫缩痛、感染性腹

7、泻引起的急性腹痛、小儿秋季腹泻等的治疗。原标准收载于甘肃省药品标准1988年版。1998年收载入卫生部药品标准中药成方制剂第十七册，此标准沿用至今，此标准中收载性状、鉴别（当归）和检查项，标准较为简单，不足以控制当归腹痛宁滴丸的质量。所以有必要提高现行质量标准。当归腹痛宁滴丸是以当归挥发油为主要原料制成的滴丸剂，当归挥发油的主要成分为苯醐类，其中藁本内酯含量最高1,藁本内酯有很强的解痉、平喘、镇定作用，临床上可用于治疗支气管炎和妇科疾病。研究显示，藁本内酯具有良好的改善微循环作用，可用于防治与微循环障碍有关的疾病2-3。与当归腹痛宁滴丸功能主治相吻合，因此当归腹痛宁滴丸的质量控制需定量测定藁本

8、内酯的含量，确保药物的有效性。当归挥发油是当归经水蒸气蒸馆，再经二氯甲烷萃取而得到的，当踹腹痛宁滴丸中有可能存在二氯甲烷溶剂残留，所以需要建立二氯甲烷溶剂残留检查项，确保药物的安全性。在验证原标准时还发现原标准中收载的当归薄层鉴别方法4,由于展开系统极性太小且点样量过大，因此修改了当归薄层鉴别项。1材料1.1 仪器 薄层色谱自动点样仪（CAMAG半自动点样仪）；薄层自动成像仪（CAMAG TLC成像仪）；Agilent 7890A （CTC顶空进样器）气相色谱仪；Sartorius 天平；电子天平（ME-204） ；Waters ALLiance e2695 型高效液相色谱仪；e2695 HP

9、LC Pump、2998 DuaL X Absorbance Detector 和 Empower 色谱工作站；资生堂CAPCELL PAK C18 （4.6 mmX250 mm, 5 urn）色谱柱，岛津Inertsil ODS-SP （4. 6 mmX250 mm, 5 u m）色谱柱和 Welch Ultimate XB-C18 （4.6 mmX250 mm, 5 um）色谱柱；KH-500DE超声波清洗器（上海超声波仪器厂）。1.2 试药当归对照药材（中国药品生物制品检定所提供，批号：120927-201014）；藁本内酯（上海源叶生物科技有限公司提供，批号：Z23M7B15162,含

10、量：98%） ；N, N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇与乙脑为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；当归腹痛宁滴丸JP3（兰州和盛堂制药有限公司提供，批号：20150401、20150402、20150403. 20150406. 20150407.20150408. 20150409. 20150701. 20150702. 20150703） 02方法与结果2.1 薄层色谱鉴别原标准中的当归薄层鉴别方法，由于展开系统极性太小，未将对照药材与样品中相应的斑点最大程度的展开（如图1A所示），所以调整展开系统的极性（如图1B所示）。另外，原标准中点样量过大，因此调整点样量。最终的方法改为：取本

11、品20粒，置乳钵中，加乙酸研磨提取2次，每次10 mL,过滤，挥干乙醒，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5 g,加乙醛5 mL,振摇2 min,分取乙醛液，挥去乙醵，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部 通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 UL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙醛（7 ： 3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。2.2 二氯甲烷溶剂残留5-72.2. 1气相色谱条件 以6%氟丙基苯-94%二甲基硅氧烷

12、为固定相的毛细管柱（DB-624,柱长为30 m,内径为0.32 mm,膜厚度为L 8 uni）;柱温为程序升温：初始温度为30 ,保持3. 5 min,以每分钟5 的速率升温至100 ,再以每分钟50。（3的速率升温至220 ,保持5 min （250 后运行6 min）；氢火焰离子化检测器检测，检测器温度250 ；进样口温度200 C；顶空进样，顶空瓶平衡温度为90 ,平衡时间30 min,进样体积300 uL。2.2.2溶液的制备2. 2. 2. 1对照品溶液的制备 取二氯甲烷（色谱级）约30 mg,精密称定（31. 5mg）,加N, N-二甲基甲酰胺稀释制成每1 mL含0.3 mg的溶

13、液，即得。2. 2. 2. 2供试品溶液的制备 取重量差异项下的肠溶滴丸，研细，混匀，取本品约3. 0 g,精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加入N, N-二甲基甲酰胺5mL,密封，振摇使溶散，即得。1.1.1 2. 2. 3阴性样品溶液的制备按制备工艺，提取当归药材的挥发油，配制不含二氯甲烷的阴性对照品，并按标准拟定的供试品溶液制备方法制成阴性对照液，即得。2.2.3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液以及供试品溶液与对照品溶液的混合溶液，按“2.2. 1”项下色谱条件进样，记录色谱图。结果表明，阴性样品色谱中，在与对照品色谱相应的出峰时间未出现相同的峰，且阴性制剂对

14、所测组分无干扰。对照品溶液中，二氯甲烷的理论塔板数均大于100000,供试品溶液中二氯甲烷峰及其相邻色谱峰的色谱分离度均大于1.5,能够实现良好的基线分离。对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液的色谱图如图2所示。2.2.4 线性关系的考察 取二氯甲烷（色谱级）约30 mg,精密称定（31.7mg）,加N, N-二甲基甲酰胺稀释制成每mL含0.6 mg的溶液，摇匀，作为线性储备液备用；分别精密量取线性储备液体1.0、2.5、4.0、5.0、6.0、7.5 mL置10 mL量瓶中，N, N-二甲基甲酰胺定容，摇匀，分别测定分析，以峰面积为纵坐标，以样品浓度为横坐标，进行线性回归处理，得到二氯甲烷的

15、回归方程为 Y=94. 818X+L 9965 (R=0. 999),结果表明，二氯甲烷在 0. 0634-0. 4755mg范围内呈良好的线性关系。2.2.5 精密度试验 精密吸取2. 2. 2项下的对照品溶液5 inL,置20 mL顶空瓶中，连续进样6次，记录峰面积，结果二氯甲烷的RSD为2.6%,表明仪器精密度良好。2.2.6 检出限及定量限试验 将线性项下溶液图谱进行计算信噪比为10的为定量限，信噪比为3的为检出限之间。结果二氯甲烷的检出限为3. 1500ug/mL,定量限为 12.6000 ug/mLo2.2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，在0、2、4、8、12、16 h进行测定，记录峰面积，结果均未检出，表明供试品溶液在16 h内稳定。2.2.8 加样回收率试验 精密量取2. 2. 4项下线性储备液适量，每三份一组，第一组加入线性储备液5.0 mL；第二组加入线性储备液10.0 mL；第三组加入线性储备液15.0 mL,分别置20 mL量瓶中用2. 2. 2工直下的阴性样品溶液溶解并稀释至刻度，按供试品