GBSDNA样本处理.docx

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1、GBS-DNA样本处理标准操作规程1 .目的规范B族链球菌核酸DNA样本制备操作。2 .范围B族链球菌核酸DNA定量检测实验的样本制备操作。3 .操作人员PCR室在岗工作人员。4 .操作步骤4.1 打开金属浴，调至37；4.2 从传递窗中取出PCR反应液管、定量参考品、阴性对照、阳性对照、提取固形物、清洗液、内参照。PCR反应液管立即放入样本准备区4冰箱。4.3 定量参考品AD及阴、阳性对照置37金属浴中复融，复融后振荡混匀，低速离心6000rpm5秒，使管盖不沾带试剂。4.4 将金属浴调至95备用。4.5样本处理4.5.1在样本管中加入Im1清洗液，用震荡器高速震荡2min制成标本悬浮液。4

2、.5.2取出全部样品放入1.5m1离心管中，13000rmin离心5min弃上清，加入Im1清洗液震荡重悬3min,13000rmin离心5min弃上清（视标本浑浊情况可重复本步骤）。4.5.3加入501清洗液重悬，再加入1管提取固形物（轻弹管底尽量将固形物倒净），用强力震荡器高速涡旋震荡3min4 .5.4阴性对照样品制备：取501阴性对照加入1.5m1离心管中，混匀。阳性对照样品制备：取501阳性对照加入1.5m1离心管中，混匀。5 .5.5将待检样品、阳性、阴性对照瞬时离心后，每管加入101内参照，95干浴2min,立即冰浴3min,13000r/min离心5min,上清液用于PCR扩增。4.6加样：从4C冰箱中取出己配制分装好的PCR反应液，每管分别加入51待测样品和阴、阳性对照品以及定量参考品，盖紧管盖后瞬时离心。4 .7离心后取出PCR管传至样本准备区到PCR扩增区的传递窗中。5 .引用文件PCR室流程记录表