Cullin4a蛋白抗体说明书.docx

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1、产品名称：Cu11in4a蛋白抗体英文名称：Anti-Cu11in4A英文别名：CU14A;CU14A;Cu14aprotein;MGC36573;MGC64071.产品规格：0.1m10.2m1注意事项:ThiSproductassupp1iedisintendedforresearchuseon1y,notforuseinhuman,therapeuticordiagnosticapp1ications.此抗体本公司有单抗和多抗，可用于免疫组化(IHC),免疫印迹(WB),酷联免疫(E1ISA),IFsIPs流式细胞术等实验(可来电索取说明)此产品本公司有标记的一抗出售，相关标记有：A1e

2、xaF1uor350标记、A1exaF1uor488标记、A1exaF1uor555标记、A1exaF1uor647标记、AP标记、APC标记、Biotin标记、Cy3标记、Cy5标记、Cy5.5标记、Cy7标记、F1TC标记、Go1d标记、HRP标记、PE标记、PE-Cy3标记、PEYY5标记、PE-CY5.5标记、PE-CY7标记、RB1TC标记保存条件：Storeat-20oCforoneyear.Avoidrepeatedfreeze/thawcyc1es.The1yophi1izedantibodyisstab1eatroomtemperatureforat1eastonemonth

3、andforgreaterthanayearwhenkeptat-20oC.Whenreconstitutedinsteri1ePH7.40.O1MPBSordiIuentofantibodytheantibodyisstab1eforat1easttwoweeksat24C.免疫组化染色：WesternB1otting具体实验步骤Western也称WeSternb1otWesternb1otting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。WCStern可以参考如下步骤进行操作：收集蛋白样品(Proteinsamp1epreparation)可以使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮

4、细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量*，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。Cu11in4a蛋白抗体(antibody,Ab)是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白，称免疫球蛋白(immunog1obu1in,Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同，可将为类Ig分为IgG、IgA、TgM、IgD和

5、IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体，称天然抗体(natura1antibody),由抗原激发免疫细胞产生的抗体，称免疫抗体(immuneantibody)或称特异地性抗体。人工制备的特异性抗体又可分为多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三种类型。Cu11in4a蛋白抗体抗血清的鉴定抗血清的效价可根据抗体的不同性质，分别采用环状沉淀试验、琼脂双向扩散、单向免疫扩散、溶血试验、凝集反应、酶免疫反应及放射免疫等方法进行测定。检查抗血清的纯度可采用免疫电泳、琼脂双向扩散及交*反应试验等方法检测。D取适量PrOteinA+GBeadS悬液，装入层析柱，用10倍柱体积的PBS(或者TBS,下同)洗

6、涤平衡层析柱。2)含抗体的血清或其它体液高速离心后，将上清与等体积2XPBS缓冲液混合，调整PH以及离子浓度后（确认PH值为70.5）,缓慢加入层析柱。3）用IO倍柱体积以上的PBS洗涤，至流出液无蛋白检出。4）加入2倍柱体积0.1M柠檬酸（CitrateAcid,pH2.7）封闭流出管，静置5分钟后收集穿出液，重复三次。测定0D280估算抗体浓度，如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE检测纯度。也可以选择0.1M甘氨酸（G1ycine,PH3.0）洗脱。5）洗脱后的抗体立即加入2/5体积的1MTris,pH9.O中和，使用MiIIiPOrC蛋白浓缩管切换到所需缓冲液，或者透析，缓冲液通常为PBS含有0.02%NaN3以及1mMEDTAo6）浓缩到所需体积，加入50%甘油；测定效价后，分装并保存在-20,避免冻结。Cu11in4a蛋白抗体的特异性是指对相应抗原或近似抗原物质的识别能力。特异性高，抗体识别能力就强，通常以交*反应率来表示。交*反应率可用竞争抑制试验测定。