禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清 兽药产品说明书和内包装标签.docx

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1、禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清兽药产品说明书和内包装标签（一）禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书B1【兽药名称】通用名禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清商品名无英文名AvianInf1uenzaVirus（H7Subtype,StrainH7-Re4）Hemagg1utinationInhibitionTestAntigen,PositiveSeraandNegativeSera汉语拼音Qin1iuganbingduH7Yaxing（H7-Re4zhu）Xueningyi

2、zhishiyanKangyuan,YangxingxueqingYuYinxingxueqing【主要成分与含】抗原为灭活的H7亚型禽流感病毒（H7-Re4株），血凝（HA）效价不低于1：128。测定鸡血清时，分别使用禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）鸡阳性血清和禽流感病毒H1试验鸡阴性血清作为对照血清，阳性血清血凝抑制（H1）抗体效价不低于1：128,阴性血清H1抗体效价不高于1：4。测定鸭和鹅血清时，分别使用禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）鸭阳性血清和禽流感病毒H1试验鸭阴性血清作为对照血清，处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1:80,阴性血清H1抗体效价低于1：IOo【性状】抗

3、原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。【作用与用途】用于H1试验检测禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）抗体。【用法与判定】1材料1.1 96孔V型（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。1.2 PH值7.07.20.01mo11PBS按照如下方法配制或购买商品化产品，PBS一经使用，于28保存不超过3周。PBS配制方法：秤量NaC180g、KC12g、十二水磷酸氢二钠36.3g、磷酸二氢钾2.4g,溶解于ddH2O中，并定容101,用氢氧化钠或盐酸调PH至7.07.2,最后1

4、21C灭菌30分钟或过滤后使用。1.3 阿氏（A1severs）液称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸储水至IOom1加热溶解后调PH值至6.1,69Kpa15min高压灭菌，28保存备用。1.4 1%鸡红细胞悬液采取24只26月龄SPF鸡的血液，与等量阿氏液混合，然后用PBS（0.01mo11,PH值7.07.2,下同）洗涤34次，每次以1500rmin离心510分钟，将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。1.5 抗原溶解冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量，用PBS溶解。2操作术式2.1 血凝（HA）试验2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.

5、025m1PBS。2.1.2 第1孔加0.025m1抗原，反复抽打35次混匀。2.1.3 从第1孔吸取0.025m1抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025m1加入第3孔，如此进行2倍系列稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025m1弃去。2.1.4 每孔加0.025m1PBS。2.1.5 每孔加入0.025m11%(V/V)鸡红细胞悬液。2.1.6 结果判定将反应板在振荡器上震荡12分钟或轻扣反应板混合反应物，置室温2030分钟或置28C4560分钟，当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时，将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(IO0%凝集)的最高稀释倍数判为血凝

6、效价。2.2 血凝抑制(HI)试验2.2.1 根据HA试验测定的效价，如果抗原凝集价测定结果为1:1024(举例)，4个血凝单位(P4HAU)=1024/4=256(即1:256)。PBS9.0m1,力口抗原1.0m1,即成1：10稀释，将1：10稀释液1.0m1加入到24.6m1PBS中,使最终浓度为1：256。2.2.2 四个单位血凝单位检测检查4HAU的血凝价是否准确，应将配制的1：256稀释液进行系列稀释，使最终稀释度为1：2、1：3、1：4、1：5、1：6和1：7。然后，从每一稀释度中取0.025m1,加入PBS0.025m1,再加入1%鸡红细胞悬液0.025m1,混匀。将血凝板置室

7、温2040分钟或置28C4060分钟，如果配制的抗原液为4HAU,则1：4稀释度将给出凝集终点；如果4HAU高于4个单位，可能1：5或1：6为终点；如果较低，可能1：2或1：3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整，使工作液确为4HAU。2.2.3 第211孔加入0.025m1PBS,第12孔加入0.05m1PBS。2.2.4 第1-2孔加入0.025m1血清，第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025m1于第3孔，依次2倍系列稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025m1弃去。2.2.5 第1-11孔均加入0.025m1的4HAU抗原，在室温(2025)下静置至少20分钟或28至少60分钟

8、。2.2.6 每孔加入0.025m11%(VZV)的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温(2025C)下静置2040分钟或284060分钟，对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。3结果判定以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的H1抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度，鸡阴性对照血清抗体效价不高于1:4(若用处理后的鸭阴性血清，则抗体效价应低于1:10)时，试验方可成立。检测鸡血清时，被检血清HI抗体效价不高于1:8判为阴性，不低于1：16判为阳性；检测处理后的鸭和鹅血清时，被检血清H1抗体效价低于1：10判为阴性，不低于1：10判为阳性。【注意事项】(I

9、)HA和H1试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。(2)准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。(3)用PH值7.07.2的PBS(0.01mo11)作为稀释液。(4)抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。(5)准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后28保存不超过1个月。（7）同一亚型不同毒株的H1试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的H1抗体效价不同。（8）鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理，并以鸭阳性血清作为HI试验阳

10、性对照血清。处理参考如下方法，可根据本实验室实际情况选择使用。胰酶-加热-高碘酸盐法A.取0.3m1血清，加0.15m1胰酶溶液（8mg/m1：200mg的P-250胰酶溶解于25m1的0.0ImOI1,pH值707.2的PBS中，混匀，过滤除菌，分装并在-15C以下保存，保存期6个月），混匀后，在56水浴灭活30分钟后冷却至室温。B.再加入0.9m1高碘酸钾（将23Omg的KI04用0.01mo11,PH7.0-7.2的PBS,定容至IOOm1过滤除菌后避光室温保存，保存期1周），混合，室温孵育15分钟。C.再加入0.9m1的丙三醇盐溶液（Im1的丙三醇加入到99m1的0.0Imo11PH值

11、7.07.2的PBS中，混匀，过滤除菌，室温保存），混合，室温孵育15分钟。D.最后加入0.75m1生理盐水，混匀，置4保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。受体破坏酶（RDE）处理法A.取1体积血清（501）,加4体积RDE（2001）,37水浴18小时（过夜）。B.再加入5体积（2501）的1.5%浓度的柠檬酸钠，混匀，置56C水浴30分钟（以破坏残余的RDE活性）。C.将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中（501红细胞+5001血清），震荡混匀后4放置1小时，期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。D.然后IOoog离心10分钟，小心吸取上层上清，用于检测。处理后的血清

12、最终为10倍稀释的血清。【规格】（I）Im1/瓶（2）2m1瓶【包装】【贮魔与有效期】T5C以下保存，有效期为24个月。【批准文号】【生产企业】仅供医诊断使用（二）禽流感病毒H7亚型（H7-Re4林）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清内包装标签【作用与用途】【用法与判定】【贮藏与有效期】【生产企业】批号:生产日期:用于H1试验检测禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）抗体。见使用说明书。-15以下，有效期为24个月。仅供兽医诊断使用禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）阳性血清（鸡）1(2)m1/瓶【作用与用途】【用法与判定】【贮飕与有效期】【生产企业】1(2)m1/瓶批号：生产日期：用于禽流感

13、病毒H7亚型（H7-Re4株）H1试验阳性对照。见使用说明书。75C以下，有效期为24个月。仅供兽医诊断使用禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）阳性血清（鸭）【作用与用途】【用法与判定】【贮就与有效期】【生产企业】批号：生产日期：用于禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）H1试验阳性对照。见使用说明书。-15以下，有效期为24个月。仅供医诊断使用1(2)m1/瓶批号:生产日期:【作用与用途】【用法与用】【贮藏与有效期】【生产企业】用于禽流感病毒HI试验阴性对照。见使用说明书。-15以下，有效期为24个月。仅供兽医诊断使用1(2)m1/瓶禽流感病毒血凝抑制试验阴性血清(鸭)批号:生产日期:【作用与用途】【用法与判定】【贮藏与有效期】【生产企业】用于禽流感病毒HI试验阴性对照。见使用说明书。-15以下，有效期为24个月。仅供兽医诊断使用